Flt-1在小細胞肺癌細胞穿過人腦微血管內皮細胞單層中的作用及機制研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文Flt1在小細胞肺癌細胞穿過人腦微血管內皮細胞單層中的作用及機制研究姓名：趙曉云申請學位級別：博士專業(yè)：細胞生物學指導教師：陳譽華20080501導其跨過人腦微血管內皮細胞(HBMEC)單層遷移【74】，但有關其穿過HBMEC單層的詳細機制尚未清楚。血管內皮生長因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)又稱為血管滲透因子，其蛋白家族包括VEGF—A，B，C，D和胎盤生長因子(

2、Placentalgrowthfactor，PIGF)。P1GF為分泌的糖蛋白，與VEGF在氨基酸序列殘基上有53％的同源性，且其生物學功能與VEGF也有相似之處，如刺激內皮細胞生長等n卜161。血管內皮生長因子受體1(VascularendothelialgrowthfactorreceperVEGFR1，又稱為Fmsliketyrosinekinase1，Fit1)，為P1GF在細胞膜上的專一受體，屬于受體酪氨酸激酶家族成員，由七個

3、免疫球蛋白樣結構的胞外區(qū)、跨膜區(qū)、近膜區(qū)、激酶插入區(qū)和C末端構成。PIGF與Fit1的胞外區(qū)結合后，可活化受體的酪氨酸激酶，活化的酪氨酸激酶在信號轉導的傳遞和生物學功能的發(fā)揮中起到重要的作用。本實驗室通過免疫組化技術檢測到小細胞肺癌細胞高表達P1GF，并證實P1GF在小細胞肺癌細胞跨人腦微血管內皮細胞單層遷移過程中發(fā)揮作用，但有關PIGF的受體Flt1在這一過程中所發(fā)揮的作用及機制尚不清楚，本研究試圖回答該問題。方法一、探討Fit1受體

4、在小細胞肺癌細胞跨人腦微血管內皮細胞單層遷移中的作用l、細胞培養(yǎng)(1)HBMEC細胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清和10％Nu血清的RPMll640培養(yǎng)液(2)NCIH209細胞培養(yǎng)于含10％新生牛血清的RPMll640培養(yǎng)液2、免疫熒光技術觀察NCIH209細胞與HBMEC單層共培養(yǎng)后內皮細胞間TJ結構改變3、蛋白抽提和Westernblot方法分析NCIH209細胞與HBMEC單層共培養(yǎng)后TJ蛋白occludin的可溶性片段和不可溶性片段的