大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老機(jī)制的研究.pdf

1、目的:在成功分離培養(yǎng)大鼠PMVECs的基礎(chǔ)上,建立穩(wěn)定可靠的D-半乳糖(D-galactose, D-gal)誘導(dǎo)的大鼠PMVECs衰老模型;從細(xì)胞周期,細(xì)胞生長(zhǎng)存活和細(xì)胞凋亡及其信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)控等方面探討PMVECs衰老的細(xì)胞分子機(jī)制.結(jié)論:1.我們聯(lián)合應(yīng)用胰蛋白酶和膠原酶消化法分離大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞,亞克隆法進(jìn)行純化,并對(duì)大鼠PMVECs進(jìn)行了系統(tǒng)的鑒定,證實(shí)為內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源,細(xì)胞純度達(dá)98.99﹪.為老年肺功能不全研究提供了理想的

2、細(xì)胞來(lái)源.目前在國(guó)內(nèi)未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道該方法不需特殊的設(shè)備,但需一定的操作技巧,一般實(shí)驗(yàn)室均可開(kāi)展.2.首次建立了D-gal誘導(dǎo)的大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老模型,為研究大鼠PMVECs衰老及老年肺功能不全的機(jī)制提供了穩(wěn)定可靠的細(xì)胞衰老模型.3.首次對(duì)D-gal誘導(dǎo)的大鼠PMVECs的衰老機(jī)制從細(xì)胞周期,細(xì)胞生長(zhǎng)存活和細(xì)胞凋亡以及信號(hào)傳導(dǎo)途徑進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究,發(fā)現(xiàn):①D-gal能調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(cyclinA、D1、E,Cdk2,p16、

3、p21、p53)來(lái)抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞衰老.ROS很可能是D-gal促衰老的主要原因.②在D-gal誘導(dǎo)的衰老PMVECs模型,從多方面觀(guān)察了細(xì)胞凋亡現(xiàn)象,發(fā)現(xiàn)衰老的細(xì)胞容易凋亡.通過(guò)分析凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2表達(dá)減少,Bax表達(dá)增加,caspase-3激活和線(xiàn)粒體降低,證實(shí)了細(xì)胞凋亡參與了D-gal促進(jìn)細(xì)胞衰老的機(jī)制,并與線(xiàn)粒體途徑有關(guān).③D-gal誘導(dǎo)大鼠PMVECs衰老過(guò)程中可同時(shí)啟動(dòng)存活與凋亡兩條途徑,即隨衰老的進(jìn)程,與細(xì)胞存