粵東地區(qū)橄欖種質(zhì)資源遺傳多樣性ISSR分析及核心種質(zhì)初步構(gòu)建.pdf

1、中國(guó)是橄欖的原產(chǎn)地，有著2000 多年的栽培歷史。在長(zhǎng)期的人工馴化、栽培生產(chǎn)過程中，產(chǎn)生了大量?jī)?yōu)良品種，但是由于不同地域間相互引種和雜交，并且缺乏系統(tǒng)的研究整理，導(dǎo)致許多品種之間的遺傳背景、親緣關(guān)系不甚清楚，這對(duì)于橄欖的生產(chǎn)管理及其育種十分不利，阻礙了橄欖產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展，因此迫切需要開展相關(guān)研究。本研究利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)其遺傳多樣性水平以及親緣關(guān)系進(jìn)行了系統(tǒng)分析，同時(shí)對(duì)基于分子數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上的橄欖核心種質(zhì)的構(gòu)建進(jìn)行了初步的探討，并

2、且對(duì)核心種質(zhì)橄欖的ITS 序列和葉片表面微形態(tài)進(jìn)行了初步分析。這些工作為橄欖品種親緣關(guān)系的鑒定、分類以及種質(zhì)資源的保存、管理以及育種提供了依據(jù)。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1、采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)影響PCR的5個(gè)主要因素(Mg2+濃度、dNTp、Taq DNA 聚合酶、模板DNA 濃度和引物濃度)在4個(gè)水平上進(jìn)行優(yōu)化篩選，建立了適合橄欖ISSR-PCR反應(yīng)的最佳體系：即20μl 體系中含有Mg2+3.0mmol/L、dNTp0.2

3、25mmol/L、Taq DNA 聚合酶1U、模板DNA 80ng和引物0.25μmol/L。
　　 2、利用篩選得到的8個(gè)ISSR 引物對(duì)64 份橄欖種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性分析，共擴(kuò)增得到128 條譜帶，其中多態(tài)性條帶99 條，多態(tài)性比率為77.34%。每個(gè)位點(diǎn)觀察等位基因數(shù)為1.7734±0.4203、有效等位基因數(shù)1.4823±0.3888、基因多樣性0.2746±0.1975、Shannon信息指數(shù)0.4072±0.2721

4、。64 份種質(zhì)的遺傳相似性系數(shù)范圍是0.5714-0.9379，平均遺傳相似性為0.7793。表明該地區(qū)橄欖種質(zhì)總體遺傳多樣性水平較低。基于遺傳相似性矩陣構(gòu)建64 份種質(zhì)的親緣關(guān)系聚類圖，64 份橄欖種質(zhì)在相似系數(shù)0.768 處被劃分為5 簇，而主坐標(biāo)分析將其分為2 大類群，兩種分析的結(jié)果存在分歧。分子聚類分析結(jié)果與供試材料來源地?zé)o關(guān)。
　　 3、以ISSR 數(shù)據(jù)聚類分析的結(jié)果為基礎(chǔ)對(duì)64 份橄欖進(jìn)行分組，組內(nèi)取樣比例按組內(nèi)個(gè)體

5、數(shù)量的簡(jiǎn)單比例(P)、平方根比例(S)、對(duì)數(shù)比例(L)和多樣性比例(G)確定和逐步壓縮法；
　　 按照初始樣本的10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%取樣。采用多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)、多態(tài)性位點(diǎn)百分率、觀測(cè)等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、Nei’s 遺傳多樣性指數(shù)和Shannon’s 信息指數(shù)等參數(shù)各個(gè)取樣結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)。將初始種質(zhì)和50個(gè)樣品數(shù)不同的樣本群的多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)、多態(tài)性位點(diǎn)百分率、觀測(cè)等位基因數(shù)、有效等

6、位基因數(shù)、Nei’s 遺傳多樣性指數(shù)和Shannon’s 信息指數(shù)分別作t檢測(cè)，最終以G 策略下的16個(gè)樣本作為核心種質(zhì)。結(jié)果表明，該核心種質(zhì)保留了初始種質(zhì)25%的樣品，多態(tài)性位點(diǎn)和多態(tài)性位點(diǎn)百分率保留率分別為92.93%和98.31%，觀測(cè)等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、Nei’s 遺傳多樣性指數(shù)、Shannon’s 信息指數(shù)的保留率分別為99.26%、102.56%、107.39%、106.29%。這說明該種質(zhì)庫(kù)可以較好的代表原有種質(zhì)庫(kù)