睡眠呼吸暫停模式間歇低氧大鼠炎癥損傷機(jī)制的研究.pdf

1、阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(Obstructive Sleep Apnea Syndrome，OSAS)是一種發(fā)病率很高的疾病，并且是多種心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。OSAS合并心血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，可能是多因素疾病。炎癥過(guò)程導(dǎo)致的內(nèi)皮功能障礙可能在OSAS的心血管疾病發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了核心作用。其中OSAS獨(dú)特的低氧模式-間歇低氧(Intermittent Hypoxia，IH)，被認(rèn)為是炎癥過(guò)程重要的始動(dòng)因素。但是間歇低氧導(dǎo)

2、致炎癥的機(jī)制以及低氧程度與炎癥反應(yīng)之間的關(guān)系尚不十分清楚。鑒于上述原因，我們建立了不同程度間歇低氧大鼠模型，觀察血清循環(huán)炎性標(biāo)志物水平及心臟和血管組織氧敏感轉(zhuǎn)錄因子活性，以探討間歇低氧及低氧程度與炎癥反應(yīng)之間的關(guān)系，進(jìn)一步明確IH誘發(fā)內(nèi)皮功能障礙的機(jī)制，為將來(lái)臨床抗炎治療提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。
　　內(nèi)容：
　　1.不同程度間歇低氧大鼠模型的建立
　　2.不同程度間歇低氧大鼠血清循環(huán)炎性標(biāo)志物的研究
　　3.間歇

3、低氧與心血管系統(tǒng)氧敏感轉(zhuǎn)錄因子的研究
　　方法：
　　第一部分：建立不同程度間歇低氧大鼠動(dòng)物模型，160只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為5組，分別給與不同低氧環(huán)境刺激，5％，7.5％，10％間歇低氧組(IH-1，2，3組)，10％持續(xù)低氧對(duì)照組(CH組)和間歇常氧對(duì)照組(SC組)各32只，分別于低氧暴露第2，4，6，8周隨機(jī)抽取8只大鼠麻醉后處死，取血清及主動(dòng)脈血管內(nèi)皮和心肌組織待用。
　　第二部分：應(yīng)用ELISA法檢測(cè)

4、血清炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-6，IL-8，CRP和抗炎細(xì)胞因子IL-10濃度。
　　第三部分：應(yīng)用ELISA法檢測(cè)大鼠心肌組織ICAM-1濃度；應(yīng)用Real-timePCR法檢測(cè)大鼠主動(dòng)脈血管內(nèi)皮和心肌組織c-fos，VEGF mRNA表達(dá)水平；Western Blot法檢測(cè)血管內(nèi)皮和心肌組織轉(zhuǎn)錄因子NF-κB P65，HIF-1α的蛋白水平。
　　結(jié)果：
　　第一部分：
　　1.不同程度間歇低氧大鼠血?dú)夥?/p>

5、析結(jié)果顯示，IH-1，2，3組大鼠最低PO2分別為35.6mmHg，40.3mmHg，48.8mmHg；CH組PO2維持在37.4-39.6mmHg之間；SC組PO2為98-102mmHg。
　　2.各程度IH組大鼠收縮壓明顯升高，4周時(shí)高于自身前水平，6周時(shí)明顯高于CH組和SC組(P<0.05)。
　　第二部分：
　　1.各程度IH組血清炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-8，IL-6和CRP水平均隨時(shí)間出現(xiàn)明顯升高，抗炎

6、因子IL-10明顯下降，F(xiàn)值分別為14.637，6.42，43.814，3.642和5.787，P值均<0.001。
　　2.在低氧暴露6周時(shí)，各程度IH組血清TNF-α和IL-8水平上升達(dá)到峰值，隨著低氧暴露時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)，血清水平出現(xiàn)下降趨勢(shì)，IL-10出現(xiàn)與之對(duì)應(yīng)的變化。而IL-6、CRP水平隨時(shí)間呈現(xiàn)持續(xù)升高的趨勢(shì)。
　　3.在炎癥反應(yīng)最嚴(yán)重的第6周時(shí)，各IH組TNF-α、IL-8和IL-6水平均明顯高于SC組(P值

7、均<0.001)且明顯高于CH組(P值均<0.05)。IL-10水平明顯低于SC組和CH組(P值<0.01和0.05)。
　　4.各程度間歇低氧組間比較，在低氧暴露6周時(shí)，IH-1組INF-α和IL-8水平明顯高于IH-3組，(F值分別為1.20，34.68，P值分別為0.049，0.046)。
　　第三部分：
　　1.IH-1組大鼠心肌組織勻漿ICAM-1濃度明顯升高，6周時(shí)達(dá)到峰值濃度，明顯高于CH組和SC組(P值

8、分別為0.009和0.000)。低氧8周時(shí)ICAM-1水平略有下降。
　　2.各IH組和CH組主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞核內(nèi)NF-κB P65蛋白水平均較SC組明顯增加(P<0.01)。IH組在6周時(shí)升高達(dá)到頂峰，在隨后的2周內(nèi)略有下降。
　　3.6周時(shí)IH-1，2，3組NF-κB P65蛋白水平均明顯高于CH組(P=0.000，0.002，0.012)。
　　4.各程度間歇低氧組間比較，IH-1組NF-κB P65蛋白水平高于I

9、H-3組(P=0.002)。
　　5.各實(shí)驗(yàn)組心肌組織HIF-1α蛋白檢測(cè)均未發(fā)現(xiàn)目的條帶，但其下游基因VEGF mRNA的內(nèi)皮和心肌表達(dá)水平在IH-1組和CH組均明顯增加，高于SC組，P值均小于0.05。
　　6.心肌組織c-fos mRNA表達(dá)水平在IH-1組和CH組明顯增加，8周時(shí)明顯高于SC組(P=0.000，0.005)。
　　結(jié)論：
　　1.不同程度間歇低氧大鼠模型可以模擬OSAS患者不同程度的睡眠低

10、氧。
　　2.間歇低氧引起大鼠收縮壓明顯升高。
　　3.間歇低氧和持續(xù)低氧均可引起系統(tǒng)性和心血管局部的炎癥反應(yīng)。
　　4.間歇低氧引起的炎癥損傷反應(yīng)比持續(xù)低氧更為嚴(yán)重。
　　5.間歇低氧引起的炎癥損傷有一定的低氧程度依賴(lài)性。
　　6.間歇低氧引起的炎癥反應(yīng)出現(xiàn)先增強(qiáng)后減弱的變化趨勢(shì)，說(shuō)明機(jī)體代償機(jī)制和適應(yīng)性反應(yīng)的存在。
　　7.間歇低氧和持續(xù)低氧均可引起多種轉(zhuǎn)錄因子的激活，主要包括NF-κB，HIF-