地西他濱與硼替佐米聯(lián)合治療急性T淋巴細胞白血病的機制研究.pdf

1、目的:白血病是血液系統(tǒng)的一種惡性疾病，病情險惡，嚴重威脅人類的健康。白血病細胞由于自我更新能力增強，增殖失控，分化障礙，凋亡受阻，侵襲并破壞人類各臟器系統(tǒng)。隨著科學技術的進步，目前對白血病的認識已更加深入、系統(tǒng)和全面，但仍存在許多亟待解決的問題，如:白血病起病的原因、發(fā)病機制、如何預防及徹底根治等?；熀驮煅杉毎浦踩允悄壳鞍籽≈委煹闹饕椒?，隨著多項新技術的開展，白血病的療效得到了提升。如生物靶向治療:抗CD20、CD33、CD5

2、2的單克隆抗體，針對BCR/ABL、 PML-RARα融合基因靶向藥物的應用，凋亡調節(jié)因子的靶向治療（針對bcl-2）等，使白血病患者明顯受益。盡管如此，但成人急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)的治療目前仍缺乏有效的治療手段，且預后差。實驗室前期工作已證實硼替佐米可抑制急性T淋巴細胞白血病的腫瘤性增生，但移植后的致瘤小鼠最終仍死于白血病，考慮存在其它的致瘤機制，值得進一步探討。尋找治療急性T淋巴細胞白血病的新的作用靶點，具有重大意義。<

3、br>　　方法:CCK-8法檢測去甲基化藥物地西他濱或聯(lián)合硼替佐米對Notch1高表達的急性T淋巴細胞白血病細胞株MOLT-4的增殖的影響;Annexin-Ⅴ/PI雙染法檢測細胞凋亡;PI染色檢測細胞周期;二代測序/轉錄組高通量測序法篩選用藥前后兩組間差異基因;RT-PCR法檢測Pax5、NF-κB(p65)及Notch1下游靶基因Hes1 mRNA的表達情況;構建攜帶Pax5過表達基因載體的慢病毒;侵染MOLT-4細胞;CCK-8法檢

4、測細胞增殖情況;RT-PCR法檢測目的基因Pax5 mRNA的表達，蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測Notch1通路下游蛋白如Hes1及凋亡蛋白如Caspase3和Caspase9的表達量。
　　結果:不同濃度的地西他濱作用于MOLT-4細胞4天，隨著時間延長和劑量的加大，地西他濱對MOLT-4細胞株的增殖抑制作用越明顯。Annexin-Ⅴ/PI雙染法檢測細胞凋亡增多，PI染色檢測檢測G0/G1期細胞比例增多，細胞被

5、阻滯在G0/G1期。且地西他濱與硼替佐米兩藥共同作用MOLT-4細胞比單用一種藥物的抑制效果更明顯。地西他濱對MOLT-4細胞增殖的作用結果顯示0.5μmol/L地西他濱作用72小時后，MOLT-4細胞的增殖活力為對照組的30.2±2.2％。以此細胞為實驗對象，與未加藥處理的MOLT-4細胞對照，篩選兩組間差異表達基因。篩選結果顯示Pax5、Sfrp2、Sulf1基因的表達量較用藥前升高，進一步PGPCR驗證Pax5mRNA表達量較用藥

6、前升高更明顯。構建攜帶Pax5高表達載體的慢病毒導入MOLT-4細胞，細胞的增殖變緩，增殖活力下降。蛋白免疫印跡法（Western blot）結果顯示Notch1通路下游蛋白Hes1的表達量減少，凋亡蛋白Caspase3和Caspase9表達量增加。
　　結論:地西他濱聯(lián)合硼替佐米較單藥能更有效抑制MOLT-4細胞的增殖，誘導細胞凋亡、阻滯細胞周期于G0/G1期。其可能機制是促進了Pax5的高表達，抑制T細胞特異性的Notch1信