硼替佐米聯(lián)合吡柔比星體外誘導(dǎo)T細(xì)胞淋巴瘤-白血病細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、 目的:T 細(xì)胞淋巴瘤(T Cell Lymphoma,TCL)是一種來源于T 淋巴細(xì)胞的惡性腫瘤性疾病,其臨床多表現(xiàn)為侵襲性或高度侵襲性,病程進(jìn)展快,生存期短,對(duì)一般的抗腫瘤藥物治療反應(yīng)不佳,預(yù)后較差,因此需要尋找對(duì)其更有效的治療措施,但至今仍無實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。蛋白酶體抑制劑硼替佐米(Bortezomib)通過影響細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)蛋白的降解,控制NF-кB活性,從而抑制與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因表達(dá),導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。吡柔比星(Pirarubici

2、n)可通過進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)迅速嵌入 DNA 核酸堿基對(duì)間,干擾轉(zhuǎn)錄過程,干擾mRNA合成,通過影響DNA聚合酶活性阻止DNA的合成等途徑抑制腫瘤細(xì)胞生長。體外實(shí)驗(yàn)及多中心臨床研究均證實(shí)硼替佐米(BTZ)、吡柔比星(THP)對(duì)多種實(shí)體腫瘤具有誘導(dǎo)凋亡的作用,但硼替佐米對(duì)T細(xì)胞淋巴瘤是否存在誘導(dǎo)凋亡作用及其機(jī)制尚未完全清楚,且硼替佐米與吡柔比星是否存在協(xié)同作用尚待進(jìn)一步研究。本研究將探討硼替佐米在淋巴瘤細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞及原代T細(xì)胞白血病細(xì)胞

3、中的誘導(dǎo)凋亡作用,同時(shí)觀察硼替佐米聯(lián)合吡柔比星的協(xié)同作用,為T細(xì)胞淋巴瘤/白血病的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)及分組:體外培養(yǎng)Jurkat細(xì)胞株,以及分離原代T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),用不同濃度梯度的BTZ、THP單用及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)細(xì)胞進(jìn)行凋亡刺激24h和48h。2、采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)改變,流式細(xì)胞技術(shù)(flow cyto

4、metry,FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence)分析細(xì)胞凋亡情況,觀察分析兩藥聯(lián)合是否存在協(xié)同效應(yīng)。3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)表示,各組間采用單因素方差分析,兩兩比較采用t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1、倒置相差顯微鏡下觀察可見,經(jīng)藥物刺激后的細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯的改變,細(xì)胞變暗無光澤,細(xì)

5、胞膜不完整,細(xì)胞體積縮小,細(xì)胞核碎裂等,隨藥物濃度或作用時(shí)間的增加細(xì)胞凋亡程度越大。2、細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒方法檢測(cè)細(xì)胞受抑制程度結(jié)果顯示:①BTZ、THP單藥對(duì)Jurkat細(xì)胞和原代T白血病細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用,且抑制率呈時(shí)間和濃度依賴性。②當(dāng)用不同濃度的硼替佐米聯(lián)合小劑量吡柔比星對(duì)Jurkat細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)24h時(shí),和硼替佐米單藥組相比,各濃度的硼替佐米聯(lián)合吡柔比星對(duì)細(xì)胞抑制率明顯升高,表明BTZ和THP聯(lián)用存在良好的協(xié)同作用;作用于

6、原代T細(xì)胞白血病細(xì)胞時(shí),BTZ和THP聯(lián)合應(yīng)用同樣出現(xiàn)顯著的協(xié)同效應(yīng)。③但BTZ單用及聯(lián)合THP對(duì)Jurkat細(xì)胞和原代T白血病細(xì)胞作用效果比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用結(jié)果顯示:①不同濃度的硼替佐米處理Jurkat細(xì)胞和原代T細(xì)胞白血病細(xì)胞24h后與正常對(duì)照組相比,隨著濃度的增加,凋亡率明顯增加。②而當(dāng)用不同濃度的硼替佐米聯(lián)合吡柔比星對(duì)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)凋亡時(shí),流式結(jié)果顯示兩藥聯(lián)合應(yīng)用促細(xì)胞凋亡效率高于硼替

7、佐米、吡柔比星單藥使用組(P<0.01)。③但BTZ誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞和原代T白血病細(xì)胞的凋亡率比較無明顯差異。4、免疫熒光技術(shù)結(jié)果顯示:Jurkat細(xì)胞和原代T白血病細(xì)胞經(jīng)藥物作用后,細(xì)胞發(fā)生凋亡而導(dǎo)致細(xì)胞膜不完整,碘化丙啶透過缺損的胞膜而使胞核著色,且隨著藥物濃度的增大,這種細(xì)胞核被染成紅色的現(xiàn)象越明顯,提示凋亡的細(xì)胞越多。結(jié)論:1、硼替佐米可以誘導(dǎo)人T細(xì)胞白血病細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞和原代T細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡,并且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率

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