鼻息肉患者Treg-Th17細(xì)胞表達(dá)與TGF-β1相關(guān)性及鼻用激素干預(yù)的研究.pdf

1、鼻息肉病(nasal polyposis，NP)是鼻腔與多個(gè)鼻竇黏膜均受累的慢性炎性病變，在上氣道炎癥性疾病中屬于常見(jiàn)病。流行病學(xué)調(diào)查表明，NP在全球的發(fā)病率已達(dá)2～4％。雖然NP的診療水平已得到了較大的提高，但是NP的治療效果仍然不能令患者完全滿意，復(fù)發(fā)率也較高。因此，給人們的身體健康和生活質(zhì)量帶來(lái)嚴(yán)重的負(fù)面影響，也給社會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在過(guò)去的數(shù)十年間，研究人員對(duì)NP的病因病理機(jī)制開(kāi)展了廣泛而深入的研究。目前認(rèn)為，NP黏膜的慢性

2、炎性反應(yīng)是由諸如感染、炎癥以及解剖變異等多個(gè)因素共同作用下所導(dǎo)致的大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的結(jié)果，其中，Treg/Th17細(xì)胞之間的不平衡狀態(tài)是造成國(guó)人NP發(fā)生發(fā)展的重要因素。
　　轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1是一種對(duì)生物發(fā)育代謝具有重要功能的細(xì)胞因子，在調(diào)節(jié)人體免疫應(yīng)答以及組織重塑中均發(fā)揮了關(guān)鍵作用。研究表明，TGF-β1能夠刺激STAT3信號(hào)，使后者活性得到顯著強(qiáng)化，執(zhí)行誘導(dǎo)na(i)ve CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的功能，并且

3、促進(jìn)IL-17A等Th17細(xì)胞效應(yīng)分子的分泌。同時(shí)，TGF-β1自身也是誘導(dǎo)na(i)ve CD4+T細(xì)胞向Treg細(xì)胞分化，維持Treg細(xì)胞功能的重要因子。TGF-β1也是促進(jìn)多種細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分分泌的關(guān)鍵調(diào)控因子，與ECM代謝密切相關(guān)，在黏膜損傷修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。但是，目前我們對(duì)于TGF-β1在NP中發(fā)揮何種功能尚未徹底了解。
　　本實(shí)驗(yàn)試圖通過(guò)分析TGF-β1及其下游信號(hào)蛋白在NP中的表達(dá)情況，以及與Th17

4、/Treg細(xì)胞的相關(guān)性分析進(jìn)一步明確TGF-β1在NP中的作用及可能的機(jī)制。同時(shí)分析鼻內(nèi)激素(intranasal steroids，INS)對(duì)TGF-β1及其下游相關(guān)分子表達(dá)的影響，進(jìn)一步豐富INS治療NP的實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
　　第一部分、鼻息肉組織中TGF-β1與Th17/Treg細(xì)胞的相關(guān)性研究
　　目的:通過(guò)檢測(cè)NP組織中TGF-β1、Foxp3和RORc的表達(dá)，以及NP患者外周血中Treg和Th17細(xì)胞的數(shù)量，分析

5、TGF-β1與Th17/Treg細(xì)胞的相關(guān)性，觀察TGF-β1在NP中可能發(fā)揮何種調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的作用，為進(jìn)一步闡明國(guó)人NP的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法:收集30例組織標(biāo)本(NP組15例;對(duì)照組15例)和30例外周血標(biāo)本(NP組15例;對(duì)照組15例)。檢測(cè)組織中TGF-β1(ELISA檢測(cè)法)及其下游信號(hào)蛋白p-Smad2(IHC及WB檢測(cè)法)含量。采用RT-PCR檢測(cè)組織中Foxp3與RORc的表達(dá)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血

6、中Th17與Treg細(xì)胞的數(shù)量。
　　結(jié)果:NP組TGF-β1及其下游信號(hào)蛋白p-Smad2含量較對(duì)照組降低。NP中Foxp3表達(dá)與外周血中的Treg細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組下降，而RORc水平與Th17細(xì)胞數(shù)量的變化趨勢(shì)與之相反。相關(guān)性分析顯示TGF-β1與Treg細(xì)胞正相關(guān)，與Th17細(xì)胞負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:TGF-β1在NP中可能通過(guò)促進(jìn)Treg細(xì)胞的分化發(fā)育在NP中發(fā)揮了抑制炎癥反應(yīng)的作用。由于TGF-β1在NP中含量下降可

7、能是造成Treg細(xì)胞功能缺陷的原因之一。
　　第二部分、鼻用激素對(duì)NP患者Th17/Treg細(xì)胞失衡的調(diào)控機(jī)制研究
　　目的:在第一部分實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過(guò)將INS作為干預(yù)手段，觀察INS治療與未予INS治療組的NP患者中TGF-β1的變化情況，進(jìn)一步闡述TGF-β1及其下游相關(guān)分子在NP發(fā)生發(fā)展中所扮演的角色，增加對(duì)于INS治療NP作用機(jī)制的認(rèn)識(shí)。
　　方法:INS治療與未予INS治療的NP組織與外周血標(biāo)本各15例。采用

8、HE染色檢測(cè)息肉BM厚度。采用ELISA檢測(cè)組織中TGF-β1、IL-10、IL-17A、SOCS3、Smad7蛋白含量，TGF-β1下游信號(hào)蛋白p-Smad2與p-STAT3則通過(guò)IHC與WB檢測(cè)。Foxp3與RORc mRNA通過(guò)RT-PCR檢測(cè)。采用熒光雙標(biāo)檢測(cè)組織中CD4+RORc+與CD4+Foxp3+細(xì)胞的表達(dá)。外周血中Th17與Treg細(xì)胞表達(dá)水平通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。
　　結(jié)果:治療組TGF-β1及其下游信號(hào)蛋白p-

9、Smad2以及SOCS3含量較未治療組升高，同時(shí)，IL-10、Foxp3、Treg細(xì)胞和BM厚度也在INS治療后出現(xiàn)了增長(zhǎng)。與此相反，治療組p-STAT3以及RORc、Th17細(xì)胞、IL-17A表達(dá)水平較未治療組明顯降低。相關(guān)性分析顯示TGF-β1與Treg細(xì)胞正相關(guān)，與Th17細(xì)胞負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:TGF-β1是NP炎癥反應(yīng)的負(fù)調(diào)節(jié)器。Smad信號(hào)可在INS的作用下得到增強(qiáng)，并參與促進(jìn)Foxp3和Treg細(xì)胞在人體的表達(dá)。除此