三角帆蚌內臟團珍珠培育及α-,2-巨球蛋白N末端保守域片斷的原核表達.pdf

1、8mm以上、光澤度好的正圓珍珠在國內外市場十分受關注，有核珍珠一般比無核珍珠的顆粒大。三角帆蚌有核珍珠常采用外套膜插核的方法；由于其外套膜比較薄，不適宜插植大核以培育大顆粒珍珠。然而，三角帆蚌內臟團區(qū)域空間很大，如果能在三角帆蚌內臟團內插核培育有核珍珠，就有可能成功培育大顆粒珍珠，能為淡水有核珍珠培育開辟一條新途徑。 近年來，河蚌疾病一直困擾著珍珠養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，預防河蚌疾病成了育珠生產(chǎn)的關鍵。對三角帆蚌的免疫因子的研究也已成為河

2、蚌疾病預防研究的熱點。 基于上述兩方面，本研究對三角帆蚌內臟團插核培育大顆粒珍珠進行了探索，并對三角帆蚌免疫因子α2M基因N末端保守域片段的原核表達載體pET32a／α2M—N的構建及其誘導表達進行了初步研究。 1.三角帆蚌內臟團珍珠培育部位生物性狀的研究 用光鏡對三角帆蚌內臟團珍珠培育部位進行組織學觀察和生化成分分析，結果顯示該部位組織結構隨性腺發(fā)育期發(fā)生變化：性腺發(fā)育前期，性腺濾泡萎縮，濾泡間充填豐富的結締組

3、織和平滑肌纖維薄層肌肉組織：發(fā)育后期，性腺濾泡豐滿，濾泡間結締組織和平滑肌纖維減少。生化分析顯示鈣、蛋白、堿性磷酸酶、碳酸脫水酶在內臟團珍珠培育部位均有分布，但鈣的含量比常規(guī)外套膜插核的部位少；說明內臟團具有珍珠生物礦化所需的生化條件，內臟團培育珍珠是可行的；但性腺發(fā)育狀況及鈣貯存的不足會影響內臟團內珍珠的培育。 2.三角帆蚌內臟團有核珍珠培育技術的研究 采用組織塊貼片培養(yǎng)包裹珠核后插入三角帆蚌內臟團的方法進行有核珍珠培

4、育，結果表明，外套膜組織細胞貼核生長正常，插入內臟團后能夠形成珍珠囊，經(jīng)45天養(yǎng)殖后，可以看到在珠核外面已有珍珠層沉積。但內臟團插核后育珠蚌的死亡率為30—50％，吐核率高達20-30％，因此如何降低育珠蚌的死亡率和吐核率是今后進一步研究的重要課題。 3.三角帆蚌α2巨球蛋白N末端保守域片斷的原核表達 以三角帆蚌血淋巴細胞提取的總RNA為模板，設計合成擴增三角帆蚌α2M基因N末端保守域片段的特異性引物，通過RT—PCR方

5、法擴增目的基因片段。將純化的RT—PCR產(chǎn)物采用酶切(Sac Ⅰ，Xhol)連接的方式，定向克隆至載體PET32 a中，構建重組質粒PET32a／α2M—N，經(jīng)PCR驗證和酶切反應驗證，及測序分析表明已成功地構建了α2M基因N末端保守域片段的原核表達載體PET32a／α2M—N。重組質粒轉化入表達菌株BL21，經(jīng)SDS—PAGE分析表明α2M—N融合蛋白能在菌株BL21內經(jīng)誘導后表達，能為α2巨球蛋白活性分析和生物學功能的研究奠定基礎。