三角帆蚌CaM和Ets基因的克隆及鑭對其表達(dá)的影響.pdf

1、鈣調(diào)蛋白（Calmodulin，CaM）是一種廣泛存在于動植物細(xì)胞內(nèi)的Ca2+受體蛋白，調(diào)節(jié)多種酶的活性，并參與介導(dǎo)生命活動進(jìn)程的炎癥反應(yīng)、代謝、細(xì)胞凋亡、肌肉收縮、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)動、神經(jīng)生長以及免疫應(yīng)答等活動，還在增強(qiáng)抗腫瘤、抗精神病、大腦記憶等方面有臨床應(yīng)用，表現(xiàn)出了良好的醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景，因此對鈣調(diào)蛋白調(diào)節(jié)機(jī)制的研究愈加廣泛而深入，但目前對貝類鈣調(diào)蛋白及其功能的研究所知甚少。為了探討三角帆蚌鈣調(diào)蛋白（hcCaM）介導(dǎo)的Ca2+信號通路的機(jī)制

2、，本研究克隆并鑒定了hcCaM基因和三角帆蚌轉(zhuǎn)錄因子（erythroblastosis-twenty six，Ets）（hcEts）基因；并且探討了鑭離子（Lanthanum，La3+，與Ca2+離子空間結(jié)構(gòu)十分相似）對hcCaM和hcEts基因表達(dá)及CaM下游蛋白堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，AKP）活性的影響。結(jié)果如下：
　　1、hcCaM基因片段長562bp，含有一個(gè)完整的450bp開放閱讀框，編碼一

3、個(gè)149個(gè)氨基酸的蛋白，具有CaM蛋白的特征性結(jié)構(gòu)—4個(gè)EF-hands結(jié)構(gòu)域，hcCaM與其它無脊椎動物和脊椎動物具有很高的同源性（95.3％-96.6%）；此外，系統(tǒng)進(jìn)化樹同樣證明它在無脊椎動物和脊椎動物中均十分保守。hcEts片段長777 bp，包含一個(gè)完整的閱讀框，編碼一個(gè)含258個(gè)氨基酸的蛋白，并具有 Ets家族蛋白的特征性結(jié)構(gòu)—ETS結(jié)構(gòu)域。hcEts基因是首次在無脊椎動物淡水珍珠蚌（三角帆蚌）中克隆并鑒定出的Ets轉(zhuǎn)錄因子

4、基因。hcEts與其它動物的的同源性為27.91%-87.1%，與瓜蟾和家雞最低，為27.91%；與櫛孔扇貝最高，為87.1%；此外，系統(tǒng)進(jìn)化分析表明hcEts和櫛孔扇貝Ets基因遺傳地位相似。
　　2、La3+對hcCaM基因表達(dá)影響的研究結(jié)果：LaCl3處理后24、72和168 h，hcCaM的表達(dá)極顯著提高（P<0.01）；LaCl3+三氟拉嗪（Trifluoperazine,TFP，一種鈣調(diào)蛋白特異性抑制劑）處理組和TFP

5、處理組中，整個(gè)試驗(yàn)過程中hcCaM基因的表達(dá)與對照組比較沒有顯著差異。結(jié)果表明La3+可以誘導(dǎo)hcCaM基因的轉(zhuǎn)錄，從而提高h(yuǎn)cCaM基因的表達(dá)，但是TFP可抑制La3+的這種作用。
　　3、La3+對hcEts基因表達(dá)影響的研究結(jié)果：LaCl3處理組中，LaCl3處理6 h后hcEts基因的表達(dá)相對對照組（0 h）極顯著降低（P<0.01），處理24 h后hcEts的表達(dá)極顯著提高（P<0.01），但在處理3、12和48 h后h

6、cEts基因的表達(dá)沒有顯著性差異，其結(jié)果與LaCl3處理后hcCaM基因的表達(dá)結(jié)果相似，表明La3+可能通過Ca2+/CaM信號通路提高h(yuǎn)cEts基因的表達(dá)；而在TFP處理組中，處理3、6和12 h后hcEts基因的表達(dá)相對對照組（0h）極顯著降低（P<0.01），表明Ca2+/CaM信號通路被TFP阻斷后，顯著降低了hcEts基因表達(dá)；處理24和48 h后hcEts基因的表達(dá)相對對照組沒有顯著性差異，暗示降低的hcEts基因表達(dá)激活了