三角帆蚌細(xì)胞法育珠初步研究和alphja-2巨球蛋白基因克隆及其表達(dá).pdf

1、本文首先對(duì)三角帆蚌外套膜外表皮細(xì)胞體外培養(yǎng)條件進(jìn)行調(diào)整，測(cè)定三角帆蚌血淋巴液滲透壓，以調(diào)整培養(yǎng)基的滲透壓，接著利用MTT法測(cè)定細(xì)胞活力，得到活力較強(qiáng)的細(xì)胞，從而確定最佳消化時(shí)間。然后在體外條件下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞3d后貼壁，培養(yǎng)效果良好。在此基礎(chǔ)上，將獲得的三角帆蚌外套膜外表皮細(xì)胞培養(yǎng)粘附在珠核表面，然后將粘附細(xì)胞的珠核插入育珠蚌體內(nèi)，并補(bǔ)加部分細(xì)胞懸液，進(jìn)行育珠。結(jié)果表明此種方法可以形成有核珍珠，初步證明了細(xì)胞法培育有核珍珠的可行性。

2、
　　 同時(shí)，利用α2M的作用機(jī)理對(duì)三角帆蚌α2M活性進(jìn)行測(cè)定，首次證明了三角帆蚌體內(nèi)α2M的存在。在α2M活性測(cè)定的基礎(chǔ)上，克隆了三角帆蚌α2M基因cDNA全序列。三角帆蚌α2M基因的克隆，更進(jìn)一步證明了α2M在三角帆蚌體內(nèi)的存在。該基因全長(zhǎng)5124bp，其中編碼區(qū)4836bp，5'端非編碼區(qū)35bp，3'端非編碼區(qū)為253bp(含polyA尾31bp)。ORF編碼1611個(gè)氨基酸，其中前23個(gè)氨基酸殘基為信號(hào)肽序列，成熟蛋白

3、分子量為177571.8D，等電點(diǎn)為5.49，且蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)為39.53，代表了成熟蛋白是穩(wěn)定的。三角帆蚌α2M具有典型的α2M家族的保守性結(jié)構(gòu)域，且與櫛孔扇貝α2M具有最高的相似性。
　　 α2M不同組織的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示，α2M基因在血細(xì)胞中有表達(dá)，而在外套膜、閉殼肌、腸和性腺中沒有表達(dá)。利用半定量PCR的方法，研究了在病理?xiàng)l件下α2M的表達(dá)變化。三角帆蚌在注射大腸桿菌和嗜水氣單胞菌12h后，其α2M的表達(dá)水平都有一定量