三角帆蚌細胞法育珠初步研究和alphja-2巨球蛋白基因克隆及其表達.pdf

1、本文首先對三角帆蚌外套膜外表皮細胞體外培養(yǎng)條件進行調(diào)整，測定三角帆蚌血淋巴液滲透壓，以調(diào)整培養(yǎng)基的滲透壓，接著利用MTT法測定細胞活力，得到活力較強的細胞，從而確定最佳消化時間。然后在體外條件下進行細胞培養(yǎng)，細胞3d后貼壁，培養(yǎng)效果良好。在此基礎(chǔ)上，將獲得的三角帆蚌外套膜外表皮細胞培養(yǎng)粘附在珠核表面，然后將粘附細胞的珠核插入育珠蚌體內(nèi)，并補加部分細胞懸液，進行育珠。結(jié)果表明此種方法可以形成有核珍珠，初步證明了細胞法培育有核珍珠的可行性。

2、
　　 同時，利用α2M的作用機理對三角帆蚌α2M活性進行測定，首次證明了三角帆蚌體內(nèi)α2M的存在。在α2M活性測定的基礎(chǔ)上，克隆了三角帆蚌α2M基因cDNA全序列。三角帆蚌α2M基因的克隆，更進一步證明了α2M在三角帆蚌體內(nèi)的存在。該基因全長5124bp，其中編碼區(qū)4836bp，5'端非編碼區(qū)35bp，3'端非編碼區(qū)為253bp(含polyA尾31bp)。ORF編碼1611個氨基酸，其中前23個氨基酸殘基為信號肽序列，成熟蛋白

3、分子量為177571.8D，等電點為5.49，且蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)為39.53，代表了成熟蛋白是穩(wěn)定的。三角帆蚌α2M具有典型的α2M家族的保守性結(jié)構(gòu)域，且與櫛孔扇貝α2M具有最高的相似性。
　　 α2M不同組織的表達檢測結(jié)果顯示，α2M基因在血細胞中有表達，而在外套膜、閉殼肌、腸和性腺中沒有表達。利用半定量PCR的方法，研究了在病理條件下α2M的表達變化。三角帆蚌在注射大腸桿菌和嗜水氣單胞菌12h后，其α2M的表達水平都有一定量