Notch信號(hào)通路在膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡中的作用研究.pdf

1、目的:檢測(cè)Notch信號(hào)通路在激活和失活狀態(tài)下，鼠膝骨關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Notch1、Bax和Bcl-2基因的表達(dá)情況，初步探討Notch信號(hào)通路對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　方法:
　　第一部分:選取32只SD大鼠，使用Hulth方法制造右膝骨關(guān)節(jié)炎模型，于造模后4周隨機(jī)處死2只大鼠，觀察右膝關(guān)節(jié)軟骨大體形態(tài)學(xué)改變并行右膝關(guān)節(jié)軟骨病理組織學(xué)檢查，顯示大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型造模成功。余下30只隨機(jī)分成三組，繼續(xù)同

2、前飼養(yǎng)，于每周星期2、5分兩次行SD大鼠膝關(guān)節(jié)腔注射。激活組(向關(guān)節(jié)腔注射Notch信號(hào)通路特異性激活劑Jagged1蛋白25ng/kg);抑制組（向關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射Notch信號(hào)通路特異性抑制劑DAPT100ng/kg）;空白對(duì)照組（向關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射同體積PBS液）。
　　第二部分:關(guān)節(jié)腔注射第8周后全部處死大鼠，取右膝股骨髁關(guān)節(jié)骨軟骨標(biāo)本，大體觀察三組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨的退變程度，行光鏡下組織形態(tài)學(xué)觀察及Mankin評(píng)分，并采用免疫組化

3、檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞中Notch1、Bax和Bcl-2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)肉眼觀察:激活組關(guān)節(jié)腫脹，脛骨平臺(tái)及股骨髁軟骨面不平整，失去光澤，關(guān)節(jié)軟骨破壞較重，有潰瘍及裂紋，部分區(qū)域關(guān)節(jié)軟骨剝脫，露出軟骨下骨，邊緣有骨贅形成;抑制組關(guān)節(jié)軟骨表面較光滑，關(guān)節(jié)無(wú)腫脹，關(guān)節(jié)軟骨較完整，可見少量軟化灶，無(wú)潰瘍及裂紋形成，無(wú)骨贅形成;空白對(duì)照組關(guān)節(jié)軟骨面欠光滑，關(guān)節(jié)軟骨破壞較輕，有少量骨贅形成，部分軟骨有裂紋，甚至有細(xì)小潰瘍出現(xiàn)。(2)

4、 HE染色:激活組關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞數(shù)目大量減少，軟骨細(xì)胞排列不整齊，細(xì)胞層次比較紊亂，表層有較大的缺損區(qū)出現(xiàn)，潮線部分或完全消失，部分區(qū)域軟骨細(xì)胞有局灶增生;抑制組關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)破壞較輕，能清晰辨認(rèn)軟骨的4層結(jié)構(gòu)，關(guān)節(jié)軟骨表面較光滑，未出現(xiàn)缺損區(qū)，軟骨細(xì)胞排列整齊，層次清晰，潮線完整;空白對(duì)照組尚可辨認(rèn)關(guān)節(jié)軟骨的4層結(jié)構(gòu)，關(guān)節(jié)軟骨面較粗糙，失去原有的平整性，在部分的軟骨表層可見細(xì)胞缺失，深層無(wú)明顯改變，潮線出現(xiàn)模糊不清晰，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞出現(xiàn)彌漫

5、性增生現(xiàn)象。激活組Mankin評(píng)分高于空白對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);抑制組Mankin評(píng)分低于空白對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);激活組Mankin評(píng)分高于抑制組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)免疫組化染色:激活組膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Notch1、Bax陽(yáng)性率高于空白對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);抑制組膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Notch1、Bax陽(yáng)性率低于空白對(duì)照組，組間比

6、較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);激活組膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Notch1、Bax陽(yáng)性率高于抑制組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。激活組膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Bcl-2陽(yáng)性率低于空白對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);抑制組膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Bcl-2陽(yáng)性率高于空白對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);激活組膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Bcl-2陽(yáng)性率低于抑制組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4) Bcl-2/Bax

7、比值:激活組Bcl-2/Bax比值低于空白對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;抑制組Bcl-2/Bax比值高于空白對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;激活組Bcl-2/Bax比值低于抑制組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:激活Notch信號(hào)通路可以加重骨關(guān)節(jié)炎，抑制Notch信號(hào)通路可以減輕骨關(guān)節(jié)炎，Notch信號(hào)通路可能與0A發(fā)生發(fā)展有關(guān);Notch信號(hào)通路激活后可能通過(guò)凋亡途徑上調(diào)Bax蛋白，下調(diào)Bcl-2蛋白，從而促進(jìn)軟骨