Notch信號通路在膝骨關節(jié)炎軟骨細胞凋亡中的作用研究.pdf

1、目的:檢測Notch信號通路在激活和失活狀態(tài)下，鼠膝骨關節(jié)軟骨細胞中Notch1、Bax和Bcl-2基因的表達情況，初步探討Notch信號通路對實驗性大鼠膝骨關節(jié)炎軟骨細胞凋亡的作用機制。
　　方法:
　　第一部分:選取32只SD大鼠，使用Hulth方法制造右膝骨關節(jié)炎模型，于造模后4周隨機處死2只大鼠，觀察右膝關節(jié)軟骨大體形態(tài)學改變并行右膝關節(jié)軟骨病理組織學檢查，顯示大鼠骨關節(jié)炎模型造模成功。余下30只隨機分成三組，繼續(xù)同

2、前飼養(yǎng)，于每周星期2、5分兩次行SD大鼠膝關節(jié)腔注射。激活組(向關節(jié)腔注射Notch信號通路特異性激活劑Jagged1蛋白25ng/kg);抑制組（向關節(jié)腔內注射Notch信號通路特異性抑制劑DAPT100ng/kg）;空白對照組（向關節(jié)腔內注射同體積PBS液）。
　　第二部分:關節(jié)腔注射第8周后全部處死大鼠，取右膝股骨髁關節(jié)骨軟骨標本，大體觀察三組大鼠膝關節(jié)軟骨的退變程度，行光鏡下組織形態(tài)學觀察及Mankin評分，并采用免疫組化

3、檢測各組軟骨細胞中Notch1、Bax和Bcl-2的表達情況。
　　結果:(1)肉眼觀察:激活組關節(jié)腫脹，脛骨平臺及股骨髁軟骨面不平整，失去光澤，關節(jié)軟骨破壞較重，有潰瘍及裂紋，部分區(qū)域關節(jié)軟骨剝脫，露出軟骨下骨，邊緣有骨贅形成;抑制組關節(jié)軟骨表面較光滑，關節(jié)無腫脹，關節(jié)軟骨較完整，可見少量軟化灶，無潰瘍及裂紋形成，無骨贅形成;空白對照組關節(jié)軟骨面欠光滑，關節(jié)軟骨破壞較輕，有少量骨贅形成，部分軟骨有裂紋，甚至有細小潰瘍出現(xiàn)。(2)

4、 HE染色:激活組關節(jié)軟骨細胞數(shù)目大量減少，軟骨細胞排列不整齊，細胞層次比較紊亂，表層有較大的缺損區(qū)出現(xiàn)，潮線部分或完全消失，部分區(qū)域軟骨細胞有局灶增生;抑制組關節(jié)軟骨結構破壞較輕，能清晰辨認軟骨的4層結構，關節(jié)軟骨表面較光滑，未出現(xiàn)缺損區(qū)，軟骨細胞排列整齊，層次清晰，潮線完整;空白對照組尚可辨認關節(jié)軟骨的4層結構，關節(jié)軟骨面較粗糙，失去原有的平整性，在部分的軟骨表層可見細胞缺失，深層無明顯改變，潮線出現(xiàn)模糊不清晰，關節(jié)軟骨細胞出現(xiàn)彌漫

5、性增生現(xiàn)象。激活組Mankin評分高于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);抑制組Mankin評分低于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);激活組Mankin評分高于抑制組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3)免疫組化染色:激活組膝關節(jié)軟骨細胞Notch1、Bax陽性率高于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);抑制組膝關節(jié)軟骨細胞Notch1、Bax陽性率低于空白對照組，組間比

6、較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);激活組膝關節(jié)軟骨細胞Notch1、Bax陽性率高于抑制組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。激活組膝關節(jié)軟骨細胞Bcl-2陽性率低于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);抑制組膝關節(jié)軟骨細胞Bcl-2陽性率高于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);激活組膝關節(jié)軟骨細胞Bcl-2陽性率低于抑制組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(4) Bcl-2/Bax

7、比值:激活組Bcl-2/Bax比值低于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義;抑制組Bcl-2/Bax比值高于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義;激活組Bcl-2/Bax比值低于抑制組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論:激活Notch信號通路可以加重骨關節(jié)炎，抑制Notch信號通路可以減輕骨關節(jié)炎，Notch信號通路可能與0A發(fā)生發(fā)展有關;Notch信號通路激活后可能通過凋亡途徑上調Bax蛋白，下調Bcl-2蛋白，從而促進軟骨