黃芪甲苷干預(yù)人膝骨關(guān)節(jié)炎退變關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的效應(yīng)及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究黃芪中的有效組成黃芪甲苷對KOA退變關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子IL-1β及TGF-β1、VEGF、Ⅱ型膠原、蛋白多糖基因的mRNA表達(dá)影響。
　　方法:提取確診為KOA臨床KELLGREN&LAWRENCE分級標(biāo)準(zhǔn)Ⅲ-Ⅳ級患者，全膝置換術(shù)后的退變膝關(guān)節(jié)軟骨，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，將培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞分離傳代后，取第3代細(xì)胞，通過蘇木素-伊紅染色及Ⅱ型膠原免疫熒光染色進(jìn)行軟骨細(xì)胞比對，并進(jìn)行VEGF、TGF-β1、Ⅱ型膠原、蛋白多糖免疫熒光染色，

2、觀察軟骨細(xì)胞退變情況后，分為6組（A組:軟骨細(xì)胞+DMEM對照組;B組:軟骨細(xì)胞加入25mmol/LAS;C組:軟骨細(xì)胞加入50mmol/LAS;D組:軟骨細(xì)胞加入75mmol/LAS;E組:軟骨細(xì)胞加入100mmol/LAS;F組:軟骨細(xì)胞加入500mmol/LAS），取4h、8h、24h、48h、72h這5個時間點，采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測各組退變軟骨內(nèi)軟骨細(xì)胞VEGF、TGF-β1、Ⅱ型膠原、蛋白多糖基因的mRNA表達(dá)情

3、況。
　　結(jié)果:在一定濃度、一定時間段內(nèi)黃芪甲苷能提高軟骨細(xì)胞TGF-β1、VEGF、Ⅱ型膠原、蛋白多糖基因mRNA的表達(dá)，減少軟骨細(xì)胞炎癥因子IL-1β的表達(dá)，達(dá)到保護(hù)軟骨，延緩關(guān)節(jié)軟骨退變的作用，通過各不同時段不同濃度退變軟骨細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)染色及不同時段、不同濃度退變軟骨細(xì)胞的TGF-β1、VEGF、Ⅱ型膠原、蛋白多糖免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，在一定濃度、一定時間段內(nèi)黃芪甲苷下退變軟骨細(xì)胞的增殖及老化的情況明顯減緩，而當(dāng)黃芪甲苷濃度太