BRAFV600E突變與miRNAs表達在甲狀腺乳頭狀癌中的相關研究.pdf

1、目的:
　　甲狀腺乳頭狀癌(PTC)是甲狀腺癌中最常見的病理類型，而BRAFV600E突變和miRNAs表達失調均為PTC發(fā)生發(fā)展中重要的分子事件。本文將通過對PTC癌灶及相應正常甲狀腺組織中BRAF基因狀態(tài)及miRNAs的表達水平的檢測，分析兩類分子的表達情況及其與臨床病理特征的關系，并初步探討B(tài)RAF基因狀態(tài)與miR-146b、miR-221和miR-222表達水平的關系，最后對兩類分子應用于術前診斷進行評價，初步探討其臨床應

2、用價值。
　　方法:
　　所有標本于2013年5月至2013年8月在天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院手術室通過對離體組織粗針穿刺和開放活檢獲得，共收集有完整臨床病理資料的經(jīng)典型PTC組織標本49例及相應配對的正常甲狀腺組織17例，共66例標本。每份標本一部分應用聚合酶鏈式反應(PCR)技術進行BRAF基因狀態(tài)檢測，另一部分通過應用TaqMan(R)探針實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法檢測miR-146b、miR-221和mi

3、R-222的表達水平。采用SPSS19.0軟件將檢測結果和臨床資料進行統(tǒng)計學分析，并進行診斷試驗評價。以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、BRAFV600E突變發(fā)生在PTC癌灶中，突變率為57.1％，未在正常甲狀腺組織發(fā)現(xiàn)其突變。相對于BRAF基因野生型，突變型的PTC的腺外侵犯和淋巴結轉移比例更高，分別占57.1％和53.6％，具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。將淋巴結轉移進一步分為中央?yún)^(qū)淋巴結轉移組和

4、側頸轉移組后，兩者在突變型組均高于未突變型組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。而BRAFV600E突變在性別、年齡、術前TSH水平、Tg水平、尿碘值、BMI、腫瘤大小、雙側性、多灶性、TNM分期和伴發(fā)結節(jié)性甲狀腺腫或橋本氏甲狀腺炎等臨床病理特征上的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2、PTC患者癌灶中miR-146b、miR-221和miR-222的相對含量2-△CT均較正常甲狀腺組織表達水平明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0

5、.05）。相對正常甲狀腺組織，癌灶中三種miRNAs表達增高倍數(shù)2-△△CT的中位數(shù)分別為16.2、11.2和7.1。miR-146b表達在PTC患者臨床病理參數(shù)上無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。在侵出腺葉方面，侵出組PTC的miR-221和miR-222表達水平較未侵出組增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而在淋巴結轉移方面和復發(fā)風險上僅miR-221表達表現(xiàn)出統(tǒng)計學差異。在其他臨床病理特征方面miR-221和miR-222的表達

6、水平均未見明顯差異。以BRAF基因狀態(tài)分組，28例突變型組miR-146b、miR-221和miR-222的相對含量2-△CT均較21例野生型組表達增高，差異有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　3、BRAFV600E突變檢測診斷PTC的特異度(Sp)100％，陽性預測值(PPV)100％，但靈敏度(Se)57.1％，陰性預測值(NPV)為44.7％，整體準確度為75％。而miR-146b、miR-221和miR-222的表達能有較

7、好區(qū)別PTC和正常甲狀腺組織。miR-146b的Se為85.7％、Sp為100％、NPV為70.8％、PPV為100％和準確度為89.4％。miR-221的Se為89.8％、Sp為100％、NPV為77.3％、PPV為100％和準確度為92.4％。miR-222的Se為87.8％、Sp為100％、NPV為73.9％、PPV為100％和準確度為90.9％。
　　結論:
　　1、BRAFV600E突變發(fā)生在PTC病灶中。突變型P

8、TC腺外侵犯和淋巴結轉移比例更高，顯示出BRAFV600E突變可能與PTC腫瘤的高侵襲性相關。
　　2、PTC癌灶中miR-146b、miR-221和miR-222的表達水平明顯高于正常甲狀腺組織。miR-146b表達未發(fā)現(xiàn)與臨床病理特征相關;miR-221表達在是否侵出腺葉、有無淋巴結轉移（中央?yún)^(qū)和側頸）和復發(fā)風險上均具有統(tǒng)計學差異;miR-222僅在侵出腺葉和側頸淋巴結轉移組的表達高于相應陰性組。三種miRNAs在BRAF基因