BRAFV600E突變與miRNAs表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌中的相關(guān)研究.pdf

1、目的:
　　甲狀腺乳頭狀癌(PTC)是甲狀腺癌中最常見(jiàn)的病理類型，而B(niǎo)RAFV600E突變和miRNAs表達(dá)失調(diào)均為PTC發(fā)生發(fā)展中重要的分子事件。本文將通過(guò)對(duì)PTC癌灶及相應(yīng)正常甲狀腺組織中BRAF基因狀態(tài)及miRNAs的表達(dá)水平的檢測(cè)，分析兩類分子的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系，并初步探討B(tài)RAF基因狀態(tài)與miR-146b、miR-221和miR-222表達(dá)水平的關(guān)系，最后對(duì)兩類分子應(yīng)用于術(shù)前診斷進(jìn)行評(píng)價(jià)，初步探討其臨床應(yīng)

2、用價(jià)值。
　　方法:
　　所有標(biāo)本于2013年5月至2013年8月在天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院手術(shù)室通過(guò)對(duì)離體組織粗針穿刺和開(kāi)放活檢獲得，共收集有完整臨床病理資料的經(jīng)典型PTC組織標(biāo)本49例及相應(yīng)配對(duì)的正常甲狀腺組織17例，共66例標(biāo)本。每份標(biāo)本一部分應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)進(jìn)行BRAF基因狀態(tài)檢測(cè)，另一部分通過(guò)應(yīng)用TaqMan(R)探針實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)miR-146b、miR-221和mi

3、R-222的表達(dá)水平。采用SPSS19.0軟件將檢測(cè)結(jié)果和臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并進(jìn)行診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)。以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、BRAFV600E突變發(fā)生在PTC癌灶中，突變率為57.1％，未在正常甲狀腺組織發(fā)現(xiàn)其突變。相對(duì)于BRAF基因野生型，突變型的PTC的腺外侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例更高，分別占57.1％和53.6％，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。將淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)一步分為中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和

4、側(cè)頸轉(zhuǎn)移組后，兩者在突變型組均高于未突變型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。而B(niǎo)RAFV600E突變?cè)谛詣e、年齡、術(shù)前TSH水平、Tg水平、尿碘值、BMI、腫瘤大小、雙側(cè)性、多灶性、TNM分期和伴發(fā)結(jié)節(jié)性甲狀腺腫或橋本氏甲狀腺炎等臨床病理特征上的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、PTC患者癌灶中miR-146b、miR-221和miR-222的相對(duì)含量2-△CT均較正常甲狀腺組織表達(dá)水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0

5、.05）。相對(duì)正常甲狀腺組織，癌灶中三種miRNAs表達(dá)增高倍數(shù)2-△△CT的中位數(shù)分別為16.2、11.2和7.1。miR-146b表達(dá)在PTC患者臨床病理參數(shù)上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。在侵出腺葉方面，侵出組PTC的miR-221和miR-222表達(dá)水平較未侵出組增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)上僅miR-221表達(dá)表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在其他臨床病理特征方面miR-221和miR-222的表達(dá)

6、水平均未見(jiàn)明顯差異。以BRAF基因狀態(tài)分組，28例突變型組miR-146b、miR-221和miR-222的相對(duì)含量2-△CT均較21例野生型組表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　3、BRAFV600E突變檢測(cè)診斷PTC的特異度(Sp)100％，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(PPV)100％，但靈敏度(Se)57.1％，陰性預(yù)測(cè)值(NPV)為44.7％，整體準(zhǔn)確度為75％。而miR-146b、miR-221和miR-222的表達(dá)能有較

7、好區(qū)別PTC和正常甲狀腺組織。miR-146b的Se為85.7％、Sp為100％、NPV為70.8％、PPV為100％和準(zhǔn)確度為89.4％。miR-221的Se為89.8％、Sp為100％、NPV為77.3％、PPV為100％和準(zhǔn)確度為92.4％。miR-222的Se為87.8％、Sp為100％、NPV為73.9％、PPV為100％和準(zhǔn)確度為90.9％。
　　結(jié)論:
　　1、BRAFV600E突變發(fā)生在PTC病灶中。突變型P

8、TC腺外侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例更高，顯示出BRAFV600E突變可能與PTC腫瘤的高侵襲性相關(guān)。
　　2、PTC癌灶中miR-146b、miR-221和miR-222的表達(dá)水平明顯高于正常甲狀腺組織。miR-146b表達(dá)未發(fā)現(xiàn)與臨床病理特征相關(guān);miR-221表達(dá)在是否侵出腺葉、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（中央?yún)^(qū)和側(cè)頸）和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)上均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;miR-222僅在侵出腺葉和側(cè)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)高于相應(yīng)陰性組。三種miRNAs在BRAF基因