中國HIV感染者48周HAART治療對細胞內(nèi)HIV-1DNA的影響和γ細胞因子的變化.pdf

1、高效抗反轉錄病毒治療(highly active antiretroviral therapy，HARRT)引入艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的臨床治療后，HIV/AIDS由不治之癥成為了可以控制的疾病。但是，單純的HARRT治療不能根治艾滋病病毒(human immunodeficiencyvirus，HIV)感染。一方面，病毒變異而出現(xiàn)耐藥基因;另一方面，HIV病毒儲存庫持續(xù)

2、存在:靜止CD4+T細胞整合有HIV-1 DNA并能轉變?yōu)殪o息狀態(tài)而長期存在;HIV病毒感染的單核細胞有抗凋亡的作用;同時還有其他細胞和組織可能成為HIV-1 DNA的“避難所”。這些機制使得HIV病毒能逃脫HAART的作用并持續(xù)地存在于感染者體內(nèi)，一旦中斷HAART即可能出現(xiàn)病毒反彈。另外，γ鏈細胞因子在抗病毒免疫應答和疾病過程中扮演了重要的角色，在HIV病毒庫的建立和清除中也可能起一定作用。關于HIV細胞內(nèi)病毒庫的研究國外已有文獻報

3、道，但在中國HIV感染者中同類研究仍很少見。觀察中國HIV感染者接受抗反轉錄病毒療法對細胞內(nèi)HIV-1 DNA的影響及其與主要的γ細胞因子的動態(tài)變化之間的關系有重要的價值，為探索鞏固抗病毒治療效果、清除HIV病毒庫的新途徑打下基礎;并期待開發(fā)新的治療方法以增強接受HAART治療患者的抗病毒免疫反應。
　　第一部分中國HIV感染者接受48周HARRT的外周血T淋巴細胞和單核細胞內(nèi)HIV-1 DNA定量檢測及其與外周血HIV-1 RN

4、A、CD4+T細胞數(shù)的關系
　　目的:觀察外周血T淋巴細胞及單核細胞是否可能作為HIV-1病毒儲存庫細胞，并觀察接受48周抗反轉錄病毒治療(HAART)的中國HIV-1感染人群中，這兩種細胞HIV DNA的動態(tài)變化，及其與主要的免疫學指標（外周血CD4+T細胞計數(shù)）和病毒學指標（血漿HIV-1 RNA水平）的關系。
　　設計:在啟動抗逆轉錄病毒治療前、啟動治療后24周和48周三個不同時間點檢測慢性HIV-1感染患者血液HIV

5、-1 RNA病毒載量、CD4+T細胞數(shù)量、單核細胞和T淋巴細胞內(nèi)的HIV-1DNA水平，及其兩兩之間的關系。
　　方法:2009年6月至2010年6月之間啟動HAART的35例慢性HIV-1感染的成人參加了這項研究，其中24名為男性，11名為女性，年齡介于20歲至62歲之間，平均(39.5±10)歲。研究期間所有患者沒有發(fā)生機會性感染或其他影響免疫反應（如各亞群T細胞和單核細胞數(shù)量或細胞因子水平）的疾病。簽署知情同意書后，每位患者

6、均在基線（0周）、24周和48周時留取20毫升外周全血。使用流式細胞儀測定T細胞亞群數(shù)量，使用磁珠分選法從外周血單個核細胞(PBMC)中分離出T淋巴細胞和單核細胞，用人DNA試劑盒提取DNA。采用實時熒光定量PCR法檢測基線（0周）、24周和48周時的血清HIV-1 RNA、CD3+和CD14+細胞的HIV-1DNA。使用SPSSv18軟件對收集的數(shù)據(jù)進行分析。
　　結果:35名從未接受過抗病毒治療的慢性HIV-1感染的成年患者被

7、納入研究。在HAART啟動的0周、24周和48周，外周血平均HIV-1 RNA水平分別為4.18+1.1（Log10拷貝/ml）、≤1.69（Log10拷貝/ml）和≤1.69(Log10拷貝/ml);平均CD4+T細胞數(shù)分別為204.42±97個/μl,336.65+101個/μl和394.37±141個/μl。統(tǒng)計學分析顯示，HIV-1RNA水平和CD4+T細胞數(shù)呈負相關關系。在HAART啟動的0月、24周和48周，在T淋巴細胞中H

8、IV-1 DNA水平分別為3.62±0.65(Log10拷貝/106細胞)、2.91±0.49(Log10拷貝/106細胞)和2.37±0.39(Log10拷貝/106細胞);在單核細胞中HIV-1 DNA水平分別為2.78±0.71(Log10拷貝/106細胞)、2.015±0.27(Log10拷貝/106細胞)和1.99±0.206(Log10拷貝/106細胞)。統(tǒng)計學分析顯示，外周血HIV-1RNA水平和T淋巴細胞中的HIV-1

9、DNA水平及單核細胞中的HIV-1DNA水平均呈正相關關系或變化趨勢相同。詳細的數(shù)據(jù)分析表明，單核細胞和T淋巴細胞中的HIV-1 DNA水平下降速度明顯遲緩于外周血HIV-1 RNA，且T淋巴細胞中的HIV-1 DNA水平下降更慢于單核細胞中HIV-1 DNA下降的速度。統(tǒng)計分析表明，不管在HAART啟動前還是HAART中，外周血CD4+T細胞與T淋巴細胞HIV-1DNA載量均呈負相關性或變化趨勢相反;但是CD4+T細胞計數(shù)和單核細胞H

10、IV-1 DNA水平?jīng)]有發(fā)現(xiàn)明顯的關聯(lián)。
　　結論:
　　1、接受抗反轉錄病毒治療(HAART)48周，使HIV-1感染者外周血HIV-1 RNA水平明顯下降，外周血CD4+T細胞數(shù)量明顯上升，二者呈顯著的負相關關系。
　　2、發(fā)現(xiàn)中國HIV-1感染者血T淋巴細胞和單核細胞可能作為HIV-1的病毒儲存庫。在HAART48周中，隨著外周血HIV-1 RNA水平逐步下降，同時T淋巴細胞HIV-1 DNA和單核細胞HIV-1

11、 RNA逐步減少;T淋巴細胞中HIV-1 DNA和血漿HIV-1 RNA水平正相關，單核細胞中的HIV-1 DNA和血漿HIV-1 RNA載量呈相同的變化方向。
　　3、觀察到HAART治療中，中國HIV-1感染者的外周血HIV-1RNA水平、單核細胞和T淋巴細胞中的HIV-1 DNA水平以及細胞中仍可檢測到HIV-1 DNA的百分比都在同步下降，但是單核細胞和T淋巴細胞中的HIV-1 DNA水平下降的速度明顯遲緩于外周血HIV-

12、1 RNA，且T淋巴細胞中的HIV-1 DNA水平下降更慢于單核細胞中HIV-1 DNA下降的速度。提示這兩種細胞都作為HIV pro-DNA的儲存庫，而T淋巴細胞起更主要的作用。國內(nèi)罕見同樣的報告。
　　4、觀察到無論在HAART啟動前還是HAART期間，中國HIV-1感染者的外周血CD4+T細胞數(shù)量與T淋巴細胞HIV-1 DNA載量均呈負相關關系;提示T淋巴細胞中HIV-1 DNA水平與病情進展有關，也可以作為判斷AIDS疾病

13、程度的觀察指標之一。但是，在HAART啟動前后的CD4+T細胞計數(shù)和單核細胞HIV-1 DNA水平未見明顯的關聯(lián)。國內(nèi)罕見同樣的報告。
　　第二部分γ鏈細胞因子參與HAART抗病毒免疫反應及其在控制HIV病毒庫中的作用
　　背景:盡管高效抗反轉錄病毒治療（HAART）能有效降低艾滋病病毒(HIV)的復制，但即使在病毒血癥得到明顯控制的患者中，CD4+T細胞的復常和免疫重建也并不都是一帆風順的，同時HIV病毒庫的清除還任重道遠

14、。近年來對γ鏈細胞因子研究的增多使人們更多地了解γ細胞因子的生物學特性，及其在始動、維持與調(diào)節(jié)機體免疫穩(wěn)態(tài)、參與抗病毒免疫反應和炎癥過程的關鍵作用，同時也在探索其在HIV病毒庫的建立和清除中可能扮演的角色。以期待開發(fā)新的策略以增強接受HAART治療患者的抗病毒免疫反應，和新的清除HIV病毒庫的途徑。
　　目的:觀察常見的γ鏈細胞因子(IL-2、IL-7和IL-21)在中國HIV-AIDS短期抗病毒治療中的動力學變化及可能的作用，分

15、析三者與主要的病毒學指標、免疫學指標和病毒庫的變化相關性及其意義。
　　材料與方法:35名符合高效抗反轉錄病毒治療(HAART)指南標準的慢性HIV-1感染者被納入研究，進行一年的隨訪研究。簽署知情同意書后，在基線、第0周、第24周、第48周每例患者抽取20ml抗凝全血。每例取2ml血清保存于-80℃?zhèn)溆?用酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ebioscience)測定血清中IL-2、IL-7和IL-21的濃度，用流式細胞儀檢測CD4+和C

16、D8+T細胞數(shù)，實時PCR測定血清中HIV-1RNA水平。
　　結果:啟動HAART后0周、24周和48周檢測的35例平均IL-2濃度分別為9.67±2.60、15.14±4.40和19.81±3.31(pg/ml)，IL-21濃度分別為75.05±25.53、100.49±48.65和130.56±46.88(pg/ml)，IL-7濃度分別為81.74±20.47、22.01±13.58和8.36±2.16(pg/ml)。結合本

17、文第一部分檢測結果，統(tǒng)計學處理顯示:治療前明顯低于正常對照組的IL-2水平和IL-21水平，在經(jīng)過48周治療后顯著升高，而在HAART治療前明顯高于正常對照組的IL-7水平在48周治療后則顯著降低。IL-2水平和IL-21水平在HAART的0周、24周和48周與CD4+T細胞計數(shù)呈正相關關系或同步增長，而平均IL-7水平在HAART的0周、24周和48周與CD4+T細胞計數(shù)顯示負相關關系或無明顯相關性。在未HAART時平均IL-2水平和

18、HIV-1 RNA病毒載量呈負相關關系，平均IL-7水平和IL-21水平和HIV-1 RNA病毒載量關系不明顯。在HAART48周時血IL-2水平和T淋巴細胞HIV-1 DNA病毒載量呈明顯的負相關關系，在HAART的0周、24周與48周時IL-7水平和T淋巴細胞HIV-1 DNA病毒載量的關系都不明顯，而HAART0周時平均IL-21水平和T淋巴細胞HIV-1 DNA病毒載量呈負相關關系。
　　結論:48周HAART治療中IL-