終末期腎臟病的血小板凋亡及多囊腎病DNA損傷的臨床與實驗研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行論述。
　　第一部分 終末期腎臟病血小板凋亡的臨床與實驗研究
　　目的:探究終末期腎臟病(ESRD)患者臨床出血風(fēng)險、血小板參數(shù)的變化特點及其影響因素與相互關(guān)系;探討尿毒癥患者的血小板凋亡及其機制。
　　方法:分臨床研究與實驗研究兩部分。在臨床研究中,通過回顧性分析278例ESRD患者的出血情況、治療方法及血清肌酐(SCr)、甲狀旁腺激素(PTH)、血小板(PLT)及其參數(shù)的改變,分別探究腎功能分期

2、、原發(fā)疾病、替代治療方法等因素對出血、血小板參數(shù)的影響。在實驗研究中,首先對16例已進入ESRD階段的尿毒癥患者分血液透析組(HD)、腹膜透析組(PD)及非透析治療組(ND)進行血小板凋亡和活化檢測。制備患者富含血小板的血漿(PRP),以血小板聚集儀檢測血小板聚集功能,流式細胞儀檢測血小板線粒體跨膜電位(ΔΨm)的去極化、磷脂酰絲氨酸(PS)的外翻表達、血小板活化指標P-選擇素(P-Selectin)的表達;在此基礎(chǔ)上以尿毒癥患者少血小

3、板血漿(PPP)與正常人洗滌血小板孵育后,用流式細胞儀檢測ΔΨm、PS及P-Selectin,用Western Blot檢測血小板Caspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2家族的表達變化。最后,分別以尿毒癥毒素肌酐、尿素與甲狀旁腺激素的不同濃度梯度刺激正常血小板并檢測血小板凋亡。
　　結(jié)果:臨床研究發(fā)現(xiàn)ESRD患者出血發(fā)生率為25％,其中狼瘡性腎炎、高血壓腎病、糖尿病腎病及慢性腎小球腎炎的患者占出血患者總數(shù)92.86％,各原發(fā)病種間

4、Hb、PLT、MPV、HCT有顯著性差異。慢性腎臟病(CKD)4期及CKD5期出血率高(26.47％、28.85％),CKD3期-5期Hb、PLT、PDW、HCT組間有顯著性差異,PLT與SCr呈負相關(guān)關(guān)系。三種不同的治療方案間比較,出血率分別為HD32.61％、PD30.95％、ND15.09％, HD及PD組PLT明顯低于ND組。實驗研究發(fā)現(xiàn)16例尿毒癥患者的血小板聚集功能明顯降低;與正常對照組相比,尿毒癥患者血小板ΔΨm降低(43

5、.48±9.58,52.76±15.36, P=0.005),PS外翻表達增加(1.36±0.51,0.99±0.27, P<0.001),P-Selectin表達無差異(P=0.14);三組間上述檢測指標無差異。尿毒癥PPP與正常血小板孵育后檢測發(fā)現(xiàn),血小板ΔΨm明顯降低(P=0.0001),PS外翻顯著增加(P=0.002),P-Selectin無明顯增加(P=0.14);Western-Blot檢測到Caspase-3活化裂解的1

6、7Kd片段,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL低表達,促凋亡蛋白Bax高表達。毒素刺激實驗發(fā)現(xiàn)隨著濃度升高,肌酐、尿素、甲狀旁腺激素均未能導(dǎo)致血小板ΔΨm去極化。
　　結(jié)論:終末期腎臟病患者具有較高出血傾向,出血風(fēng)險與原發(fā)疾病有關(guān)并隨著腎功能的進展而增加,患者血小板數(shù)量隨著腎功能進展而減少。血液透析與腹膜透析患者較高的出血風(fēng)險與血小板減低有關(guān)。尿毒癥患者存在增強的血小板凋亡,這種凋亡趨勢是多種毒素長期綜合作用的結(jié)果,不能被透析糾正

7、且與透析方式無關(guān)。血小板凋亡可能導(dǎo)致尿毒癥血小板減少及血小板功能障礙。
　　第二部分 多囊腎病DNA損傷的實驗研究
　　目的:研究常染色體顯性遺傳多囊腎病(ADPKD)患者及其家系成員外周血淋巴細胞DNA的損傷及其基因穩(wěn)定性。
　　方法:采用單細胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)研究10例 ADPKD患者(A組)、1個ADPKD家系中3例無癥狀者(B組)、20例健康對照者(C組)外周血淋巴細胞的DNA損傷及在0.5Gy照射后的

8、DNA損傷情況。采用彗星分析軟件(CASP)進行圖像分析,以尾DNA含量(TDNA％)評價淋巴細胞的DNA損傷程度。
　　結(jié)果:A組照射前、后TDNA％(8.85％±0.14％,14.84±0.77％)及照射后TDNA％的增加值(5.99％±0.77％)均顯著高于 C組(7.50％±0.37％,12.46％±0.26％,4.96％±0.44％);B組均無臨床癥狀,但其中2例照射前、后TDNA％均與C組相似,1例照射前、后TDNA％