終末期腎臟病的血小板凋亡及多囊腎病DNA損傷的臨床與實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述。
　　第一部分 終末期腎臟病血小板凋亡的臨床與實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探究終末期腎臟病(ESRD)患者臨床出血風(fēng)險(xiǎn)、血小板參數(shù)的變化特點(diǎn)及其影響因素與相互關(guān)系;探討尿毒癥患者的血小板凋亡及其機(jī)制。
　　方法:分臨床研究與實(shí)驗(yàn)研究兩部分。在臨床研究中,通過回顧性分析278例ESRD患者的出血情況、治療方法及血清肌酐(SCr)、甲狀旁腺激素(PTH)、血小板(PLT)及其參數(shù)的改變,分別探究腎功能分期

2、、原發(fā)疾病、替代治療方法等因素對(duì)出血、血小板參數(shù)的影響。在實(shí)驗(yàn)研究中,首先對(duì)16例已進(jìn)入ESRD階段的尿毒癥患者分血液透析組(HD)、腹膜透析組(PD)及非透析治療組(ND)進(jìn)行血小板凋亡和活化檢測(cè)。制備患者富含血小板的血漿(PRP),以血小板聚集儀檢測(cè)血小板聚集功能,流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板線粒體跨膜電位(ΔΨm)的去極化、磷脂酰絲氨酸(PS)的外翻表達(dá)、血小板活化指標(biāo)P-選擇素(P-Selectin)的表達(dá);在此基礎(chǔ)上以尿毒癥患者少血小

3、板血漿(PPP)與正常人洗滌血小板孵育后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ΔΨm、PS及P-Selectin,用Western Blot檢測(cè)血小板Caspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2家族的表達(dá)變化。最后,分別以尿毒癥毒素肌酐、尿素與甲狀旁腺激素的不同濃度梯度刺激正常血小板并檢測(cè)血小板凋亡。
　　結(jié)果:臨床研究發(fā)現(xiàn)ESRD患者出血發(fā)生率為25％,其中狼瘡性腎炎、高血壓腎病、糖尿病腎病及慢性腎小球腎炎的患者占出血患者總數(shù)92.86％,各原發(fā)病種間

4、Hb、PLT、MPV、HCT有顯著性差異。慢性腎臟病(CKD)4期及CKD5期出血率高(26.47％、28.85％),CKD3期-5期Hb、PLT、PDW、HCT組間有顯著性差異,PLT與SCr呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。三種不同的治療方案間比較,出血率分別為HD32.61％、PD30.95％、ND15.09％, HD及PD組PLT明顯低于ND組。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)16例尿毒癥患者的血小板聚集功能明顯降低;與正常對(duì)照組相比,尿毒癥患者血小板ΔΨm降低(43

5、.48±9.58,52.76±15.36, P=0.005),PS外翻表達(dá)增加(1.36±0.51,0.99±0.27, P<0.001),P-Selectin表達(dá)無差異(P=0.14);三組間上述檢測(cè)指標(biāo)無差異。尿毒癥PPP與正常血小板孵育后檢測(cè)發(fā)現(xiàn),血小板ΔΨm明顯降低(P=0.0001),PS外翻顯著增加(P=0.002),P-Selectin無明顯增加(P=0.14);Western-Blot檢測(cè)到Caspase-3活化裂解的1

6、7Kd片段,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL低表達(dá),促凋亡蛋白Bax高表達(dá)。毒素刺激實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著濃度升高,肌酐、尿素、甲狀旁腺激素均未能導(dǎo)致血小板ΔΨm去極化。
　　結(jié)論:終末期腎臟病患者具有較高出血傾向,出血風(fēng)險(xiǎn)與原發(fā)疾病有關(guān)并隨著腎功能的進(jìn)展而增加,患者血小板數(shù)量隨著腎功能進(jìn)展而減少。血液透析與腹膜透析患者較高的出血風(fēng)險(xiǎn)與血小板減低有關(guān)。尿毒癥患者存在增強(qiáng)的血小板凋亡,這種凋亡趨勢(shì)是多種毒素長期綜合作用的結(jié)果,不能被透析糾正

7、且與透析方式無關(guān)。血小板凋亡可能導(dǎo)致尿毒癥血小板減少及血小板功能障礙。
　　第二部分 多囊腎病DNA損傷的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:研究常染色體顯性遺傳多囊腎病(ADPKD)患者及其家系成員外周血淋巴細(xì)胞DNA的損傷及其基因穩(wěn)定性。
　　方法:采用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)研究10例 ADPKD患者(A組)、1個(gè)ADPKD家系中3例無癥狀者(B組)、20例健康對(duì)照者(C組)外周血淋巴細(xì)胞的DNA損傷及在0.5Gy照射后的

8、DNA損傷情況。采用彗星分析軟件(CASP)進(jìn)行圖像分析,以尾DNA含量(TDNA％)評(píng)價(jià)淋巴細(xì)胞的DNA損傷程度。
　　結(jié)果:A組照射前、后TDNA％(8.85％±0.14％,14.84±0.77％)及照射后TDNA％的增加值(5.99％±0.77％)均顯著高于 C組(7.50％±0.37％,12.46％±0.26％,4.96％±0.44％);B組均無臨床癥狀,但其中2例照射前、后TDNA％均與C組相似,1例照射前、后TDNA％