外周血線粒體DNA拷貝數(shù)與急性冠脈綜合征患病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：
　　如今，急性冠脈綜合征（Acute coronary syndrome, ACS）屬于在缺血性心臟?。↖schemia Heart Disease，IHD）類疾病中致死致殘的主要原因。因此，ACS患者的早期診治與其預(yù)后水平息息相關(guān)。
　　線粒體作為細(xì)胞中的能量制造結(jié)構(gòu)，能夠?qū)?xì)胞內(nèi)能量的產(chǎn)生，以及細(xì)胞內(nèi)氧化與還原狀態(tài)進(jìn)行調(diào)節(jié)，同時(shí)與活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的生成也具有一定

2、的關(guān)系。但由于缺乏具有保護(hù)作用的組蛋白，線粒體 DNA（Mitochondrial DNA，mtDNA）對(duì)自身?yè)p傷的修復(fù)能力極其有限。在受到氧化應(yīng)激反應(yīng)后其損傷的發(fā)生率要明顯高于核基因組DNA。近期，研究證據(jù)發(fā)現(xiàn)血管組織中mtDNA損傷與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。然而，ACS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與外周血白細(xì)胞mtDNA拷貝數(shù)的關(guān)系卻鮮見(jiàn)報(bào)道，這種現(xiàn)象是否具有普遍意義仍不清楚。本課題針對(duì)400名前往我科就診的ACS疑似癥狀的人群進(jìn)行研究，以探

3、索外周血mtDNA拷貝數(shù)與ACS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，并通過(guò)Gensini評(píng)分對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變的嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估，了解外周血mtDNA拷貝數(shù)與急性冠脈綜合征嚴(yán)重程度是否存在相關(guān)性。從而驗(yàn)證mtDNA拷貝數(shù)是否能為ACS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)以及嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)提供證據(jù)支持，顯著提高ACS患者的預(yù)后水平。
　　方法：
　　1.本課題采用橫斷面研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法，納入年齡為31-87歲的400例前往第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院心血管內(nèi)科就診的疑似

4、ACS患者。所有入組的研究對(duì)象均為漢族。
　　2.采集400例入組人群的外周血細(xì)胞，利用 Qiagen試劑盒提取外周血細(xì)胞的DNA，放-80℃冰箱冷凍保存。
　　3.采用實(shí)時(shí)相對(duì)定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction， qPCR）來(lái)測(cè)定納入的急性冠脈綜合征組及不滿足診斷的對(duì)照組中所有研究對(duì)象的外周血細(xì)胞中mtDNA的相對(duì)拷貝數(shù)。
　　4.在第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院

5、倫理委員會(huì)和納入研究人群的知情同意下，收集所有研究對(duì)象的年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、體重、吸煙史、高血壓史、糖尿病史以及血液檢查中的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、高密度脂蛋白，低密度脂蛋白、甘油三酯、總膽固醇、空腹血糖、肌酐和尿酸等結(jié)果。與此同時(shí)，所有入組人群均進(jìn)行冠狀動(dòng)脈造影，記錄結(jié)果后通過(guò)Gensini評(píng)分對(duì)冠狀動(dòng)脈血管病變的嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估，而后根據(jù)400名入組人群Gensini評(píng)分的四分位數(shù)間距從輕到重分為4組。
　　5.通過(guò)SPSS22.0軟件

6、對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行分析，包括ACS患者組與對(duì)照組間，及四個(gè) Gensini評(píng)分組間的外周血 mtDNA拷貝數(shù)是否存在差異；mtDNA拷貝數(shù)與Gensini評(píng)分間是否存在相關(guān)性；以優(yōu)勢(shì)比（Odds Radio，OR）以及優(yōu)勢(shì)比的95％可信區(qū)間（Confidence Interval，CI）來(lái)估計(jì)mtDNA拷貝數(shù)與ACS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。研究中所有P的取值均為雙尾，P<0.05或95%CI不包含1.0被認(rèn)為具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.本研

7、究已經(jīng)于Clinicaltrial.gov網(wǎng)站上進(jìn)行注冊(cè)，注冊(cè)號(hào)為NCT02500823。
　　結(jié)果：
　　1.研究對(duì)象基線資料分布特征。不同 Gensini評(píng)分組在基線資料如：性別（P=0.163），年齡（P=0.812），體質(zhì)指數(shù)（P=0.623）以及糖尿?。≒=0.110），高血壓（P=0.072）和吸煙史（P=0.363）中均具有良好的匹配性，未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2. mtDNA拷貝數(shù)的分布特征。急性冠脈綜

8、合征患者外周血中mtDNA拷貝數(shù)為0.78（range：0.61-1.02）低于對(duì)照組外周血mtDNA拷貝數(shù)0.83（range：0.70-1.15），二者存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ P<0.001）。根據(jù)研究對(duì)象的冠狀動(dòng)脈狹窄程度評(píng)分（Gensini評(píng)分）的四分位數(shù)間距進(jìn)行分組，其線粒體DNA拷貝數(shù)分別為0-22分組是0.84(0.70-1.15)，22-55分組為0.81(0.70-1.01)，55-96分組是0.79(0.70-0.98

9、)和大于96分為0.77(0.61-0.94)，該四組間的mtDNA拷貝數(shù)具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.001）。
　　3. mtDNA拷貝數(shù)與Gensini評(píng)分相關(guān)性。以mtDNA的拷貝數(shù)水平為應(yīng)變量， Gensini評(píng)分作為自變量，利用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)來(lái)對(duì)mtDNA拷貝數(shù)與冠狀動(dòng)脈血管的狹窄程度（Gensini評(píng)分）是否具有相關(guān)性進(jìn)行分析。分析發(fā)現(xiàn) mtDNA拷貝數(shù)與Gensini評(píng)分具有顯著的負(fù)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=

10、-0.387，P<0.001。mtDNA拷貝數(shù)隨著Gensini評(píng)分的升高而逐漸降低。
　　4.通過(guò)非條件logistic回歸來(lái)分析mtDNA拷貝數(shù)與ACS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)，在同樣經(jīng)過(guò)低密度脂蛋白（LDL-C），高密度脂蛋白（HDL-C），總甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）等血脂指標(biāo)，肌酐（Creatinine），尿酸（Uric acid）等腎功能指標(biāo)，高血壓史、糖尿病史、吸煙史、性別、年齡等混雜因素的校正后，mtDNA拷貝數(shù)小于

11、0.83的研究人群與mtDNA拷貝數(shù)大于等于0.83的人群相比較，其ACS患病風(fēng)險(xiǎn)出現(xiàn)了顯著的增高（adjusted OR=2.34,95%CI,1.43-3.83，P<0.001）。進(jìn)一步將對(duì)照組mtDNA拷貝數(shù)以四分位數(shù)法取得截?cái)嘀担砂l(fā)現(xiàn)外周血白細(xì)胞的mtDNA拷貝數(shù)與ACS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈劑量依賴關(guān)系（P<0.001），以第一個(gè)四分位點(diǎn)（第25個(gè)百分點(diǎn)值）即mtDNA拷貝數(shù)大于0.88為參考值，mtDNA拷貝數(shù)分別為第50個(gè)百分點(diǎn)值和

12、第75個(gè)百分點(diǎn)值作為截?cái)嘀档难芯咳巳侯净糀CS的風(fēng)險(xiǎn)逐漸增加[adjusted OR分別為1.78(95%CI,1.15-3.51)，2.21(95%CI,1.65-3.74)和4.83(95%CI,2.67-8.64)]。
　　結(jié)論：
　　ACS患者與對(duì)照組的外周血mtDNA拷貝數(shù)具有顯著差異，不同Gensini評(píng)分組間mtDNA水平也具有顯著差異，并且mtDNA拷貝數(shù)與Gensini評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)。急性冠脈綜合癥患者外