GSK3β在病理性瘢痕中的表達和意義.pdf

1、實驗目的
　　 病理性瘢痕是真皮及真皮下創(chuàng)傷后纖維組織異常增生,創(chuàng)面過度修復,不正常愈合所引起的,臨床上分為增生性瘢痕和瘢痕疙瘩兩種類型。病理性瘢痕的產(chǎn)生組織學上以創(chuàng)傷后組織過度修復引起膠原及大量細胞外基質產(chǎn)生和沉淀為特征。病理性瘢痕的形成不僅影響了美觀,而且危害了人們的身心健康,同時可以伴有瘙癢,疼痛等不適,影響日常工作和生活,甚至形成經(jīng)久不愈的潰瘍,發(fā)生惡變。所以對病理性瘢痕產(chǎn)生的機制及治療方法的研究具有重要的科研及臨床意義

2、。病理性瘢痕發(fā)病機制十分復雜,眾多國內(nèi)外學者從皮膚張力,年齡,部位,皮膚色素,感染,異物,遺傳機制等方面對病理性瘢痕的發(fā)病機制進行了一系列的研究,病理性瘢痕的形成是多種因素共同作用的結果是學者們目前普遍認可的觀點。本實驗通過研究GSK3β在病理性瘢痕中的表達情況,探討Wnt/β-catenin信號通路在病理性瘢痕發(fā)病機制中的作用及相互關系,為臨床預防和治療瘢痕提供實驗和理論依據(jù)。
　　 實驗方法
　　 隨機選取瘢痕疙瘩患

3、者30例為A組,其中男性20例,女性10例,年齡在18-50歲,平均年齡36歲,病變部位包括:面部,四肢,胸背部等。增生性瘢痕患者30例為B組,男性患者15例,女性患者15例,年齡在15-65歲,平均年齡42歲,病變部位包括:耳垂,頭面部,頸肩,前胸等。以上患者均無遺傳性疾病,無皮膚,免疫,傳染等全身疾病,術前均未用過激素及其它免疫抑制劑,局部無感染,破潰,且未進行激光,冷凍,放射等治療。同時隨機選取其他整形美容手術患者切除的正常皮膚組

4、織20例,其中男性2例,女性18例,年齡在18-50歲,平均年齡30歲,部位以四肢,面部為主,作為對照組C。將手術中切取的新鮮組織標本修剪成1.0×0.5×0.3厘米大小,置于10%甲醛中固定2天,石蠟包埋,做成3μm厚的切片置于載玻片上,脫蠟至水,蒸餾水沖洗3次,每次3分鐘,抗原微波修復,修復后每張切片滴加3%H2O250μl恒溫水浴箱內(nèi)孵育15分鐘,以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。PBS沖洗3次,每次3分鐘,每片滴加免疫性羊血清50μl

5、,恒溫水浴箱內(nèi)孵育15分鐘。每片滴加1:100稀釋的一抗GSK3β50μl,4℃濕盒過夜。PBS沖洗3次,每次3分鐘。每片滴加生物素化二抗50μl,恒溫水浴箱內(nèi)孵育15分鐘。PBS沖洗3次,每次3分鐘。每片滴加生物素化三抗50μl,恒溫水浴箱內(nèi)孵育15分鐘。PBS沖洗3次,每次3分鐘。每片滴加DAB顯色劑100μl,在顯微鏡下觀察染色程度,顯色3分鐘,用蒸餾水終止顯色。蘇木素復染30秒,鹽酸乙醇分化,PBS沖洗反藍5分鐘。干燥后,中性樹

6、膠封片,保存,照相。GSK3β染色后胞漿中呈現(xiàn)染成黃色,棕黃色或棕褐色的結構,為陽性結果。不見黃染結構即為陰性結果。采用雙盲法統(tǒng)計陽性率及陰性率。①陽性率＜20%,為陰性結果。②陽性率20%-40%胞漿染色呈黃色(+)。③陽性率40%-60%胞漿染色呈棕黃色(++)。④陽性率＞60%,胞漿染色呈棕褐色(+++)。采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗統(tǒng)計分析,取檢驗水準α=0.05,P＜0.05具有統(tǒng)計學

7、意義。
　　 實驗結果
　　 一、GSK3β在病理性瘢痕組織中的定位
　　 GSK3p的表達主要定位于真皮內(nèi)成纖維細胞的細胞漿中,呈黃色或棕黃色顆粒,呈彌漫性分布。
　　 二、GSK3β在成纖維細胞中的表達和對比
　　 GSK3β在A,B組呈陽性或強陽性表達,在C組中低表達或不表達。A,B組與C組比較其差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),A,B組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。