骨橋蛋白在病理性瘢痕中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)在增生性瘢痕(Hypertrophic scar；HS)和瘢痕疙瘩(Keloid)的表達(dá)規(guī)律,探討其在病理性瘢痕(Pathological scar)發(fā)生、發(fā)展過程中的意義,為探索病理性瘢痕的發(fā)病機(jī)制,尋找新的臨床治療方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:采集臨床標(biāo)本30例,分為增生性瘢痕組(Hypertrophic scar group；HSG)(n=10),瘢痕疙瘩組(Keloid group；

2、KG)(n=10),正常皮膚組(Controlgroup；CG)(n=10)。常規(guī)石蠟包埋切片,蘇木精-伊紅(HE)染色,免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本組織中骨橋蛋白的表達(dá)。免疫組化OPN陽(yáng)性表達(dá)為出現(xiàn)黃色或棕褐色顆粒,采用Ax-70顯微成像系統(tǒng)采集實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖像,每張切片選取5個(gè)視野,并用ImagePro-Plus6.0(IPP6.0)圖像分析軟件,測(cè)得每張照片中陽(yáng)性顆粒數(shù)量、平均光密度和積分光密度值,應(yīng)用GraphPad Prism5.0統(tǒng)

3、計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,所有數(shù)據(jù)采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn),兩兩比較采用t檢驗(yàn)。結(jié)果:①組織形態(tài)學(xué)改變:正常皮膚組表皮透明層與角質(zhì)層相對(duì)較厚；真皮乳頭突出明顯,乳頭數(shù)目較多；網(wǎng)織層見粗大的膠原,成纖維細(xì)胞附著,核小,著色深,細(xì)胞質(zhì)少,呈嗜酸性,數(shù)目較少。增生性瘢痕組表皮基底層和棘層細(xì)胞相對(duì)層數(shù)較多,其細(xì)胞間連接較正常皮膚顯得松散；顆粒層變薄；透明層與角質(zhì)層變薄明顯；真皮乳頭突出度較正常皮膚低矮,較平,乳頭數(shù)目較正常皮膚減少；網(wǎng)織層較厚

4、,較致密,見粗大的膠原,染色深,較不規(guī)則,并可見血管、淋巴管,毛細(xì)血管擴(kuò)張；成纖維細(xì)胞兩層均見,細(xì)胞較大,核較小,著色較深,細(xì)胞質(zhì)較多,呈弱嗜堿性,數(shù)目多。瘢痕疙瘩組表皮萎縮,基底層、棘層細(xì)胞胞體大,層數(shù)增加,相對(duì)層數(shù)較多；顆粒層、透明層與角質(zhì)層僅見較薄的嗜酸性染色層,無法區(qū)分；真皮乳頭數(shù)目少,低平；網(wǎng)織層厚,致密,見粗大的膠原,染色深,不規(guī)則,排列紊亂,有玻璃樣變性,并可見血管、淋巴管,毛細(xì)血管閉鎖；成纖維細(xì)胞兩層均見,細(xì)胞較大,核較

5、大,著色淺,核仁明顯,細(xì)胞質(zhì)較多,呈弱嗜堿性,數(shù)目多。②表皮免疫組化改變:OPN染色呈黃色、黃棕色或黃褐色顆粒,在CG僅表皮基底層有表達(dá),而HSG、KG表皮基底層、棘層等均有表達(dá)。免疫組化圖像分析結(jié)果顯示,CG、HSG、KG各組OPN陽(yáng)性顆粒數(shù)量分別為45.70±4.39,74.20±6.98,80.30±7.02。HSG和KG較CG顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HSG與KG間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CG、HSG

6、、KG各組平均光密度值分別為0.2246±0.0017,0.2329±0.0010,0.2410±0.0018,HSG、KG較CG升高,KG較HSG升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CG、HSG、KG各組積分光密度值分別為1293±45.52,1622±148.4,1924±134.3,HSG、KG較CG升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HSG與KG間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。③真皮免疫組化改變:OPN染色呈黃色、

7、黃棕色或黃褐色顆粒,在CG真皮層表達(dá)不明顯,HSG、KG真皮均表達(dá)明顯,特別在KG中染色強(qiáng)度強(qiáng)、數(shù)量多。真皮免疫組化圖像分析結(jié)果顯示,CG、HSG、KG各組OPN陽(yáng)性顆粒數(shù)量分別為44.70±4.006,102.5±1.682,125.1±7.622,HSG、KG較CG增多,KG較HSG增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CG、HSG、KG各組平均光密度值分別為0.1995±0.0021,0.2228±0.0017,0.2329±0