姜黃素對(duì)慢性酒精肝損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、第一部分姜黃素對(duì)乙醇誘導(dǎo)的大鼠原代肝細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用
　　目的:以Sparague-Dawley大鼠(簡(jiǎn)稱SD大鼠)原代肝細(xì)胞為研究對(duì)象,建立酒精肝損傷模型,探討酒精對(duì)肝細(xì)胞的氧化損傷以及姜黃素對(duì)其的保護(hù)作用,并探討姜黃素對(duì)肝細(xì)胞HO-1活性表達(dá)的誘導(dǎo)。
　　方法:1、分離并培養(yǎng)SD大鼠原代肝細(xì)胞,用不同濃度乙醇(0～200mmol/L)對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞染毒8h,或者100mmol/L無水乙醇染毒不同時(shí)間(0～24h)

2、,檢測(cè)細(xì)胞的LDH釋放水平、AST水平以及氧化/抗氧化系統(tǒng)水平(MDA水平、GSH含量和SOD活性)。
　　2、100mmol/L無水乙醇染毒細(xì)胞前1h用不同劑量姜黃素(0～50μmol/L)預(yù)處理,或者乙醇染毒前不同時(shí)間(0～5h)用15μmol/L姜黃素預(yù)處理,檢測(cè)細(xì)胞LDH、AST、MDA水平,GSH含量和SOD活性。
　　3、梯度離心法分離提取各組肝細(xì)胞微粒體,檢測(cè)HO-1酶的活性。
　　結(jié)果:1、隨著乙醇濃度

3、的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠原代肝細(xì)胞LDH釋放水平和AST水平顯著增高,MDA水平升高,GSH含量和SOD活性下降,在濃度為100mmol/L和時(shí)間為8h時(shí)影響程度明顯,P值均<0.05。
　　2、與乙醇對(duì)照組相比,提前用姜黃素干預(yù)可有效抑制LDH的釋放、抑制AST和MDA水平的升高,提高GSH含量以及SOD活性,預(yù)作用時(shí)間為1h、劑量為15μmol/L時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3、姜黃素能上調(diào)HO-1蛋白

4、表達(dá),提高肝細(xì)胞內(nèi)HO-1酶的活性,以15μmol/L的劑量預(yù)作用1h時(shí)效果最明顯(P<0.05)。
　　結(jié)論:乙醇誘導(dǎo)的大鼠原代肝細(xì)胞氧化損傷程度與給予乙醇的濃度及其作用時(shí)間呈正相關(guān),姜黃素能夠有效降低乙醇誘導(dǎo)的肝細(xì)胞氧化損傷,并能誘導(dǎo)HO-1發(fā)揮抗氧化作用。
　　第二部分姜黃素對(duì)BALB/c小鼠慢性酒精性肝損傷的干預(yù)作用
　　目的:以BALB/c小鼠為研究對(duì)象,建立慢性酒精性肝損傷模型,并探討姜黃素對(duì)酒精誘導(dǎo)的肝臟

5、氧化損傷的保護(hù)作用。
　　方法:1、將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為4組(A:正常對(duì)照組,B:姜黃素組,C:酒精組,D:酒精+姜黃素組),C、D兩組梯度酒精暴露6周(前四周灌胃量為2.4g/kg/day,后兩周增加到4g/kg/day)建立慢性酒精性肝損傷模型,B、D兩組給予75mg/kg/d的姜黃素行灌胃干預(yù)。
　　2、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收集小鼠血液及肝組織標(biāo)本,制作肝組織病理切片,檢測(cè)血清轉(zhuǎn)氨酶(AST、ALT)水平和脂質(zhì)代謝(TC、TG、H

6、DL-C)水平。
　　3、檢測(cè)肝組織ROS含量和氧化/抗氧化系統(tǒng)水平(T-AOC、GSH、GPx、GST、MDA)。
　　結(jié)果:1、正常對(duì)照組和姜黃素組小鼠體重增長(zhǎng)明顯大于酒精灌胃的兩組(P值均<0.05),但姜黃素的補(bǔ)充并未明顯改善由酒精灌胃所造成的體重增長(zhǎng)緩慢這一情況。
　　2、與正常對(duì)照組相比,酒精灌胃組肝組織切片可見明顯的脂肪變性、血清轉(zhuǎn)氨酶AST、ALT水平提高(P<0.05),以及血清TC、TG含量升高(P

7、<0.05)、HDL-C含量降低(P>0.05)。給予姜黃素干預(yù)后,可見肝臟脂肪變性有明顯減輕,AST、ALT水平下降,血脂紊亂恢復(fù)正常。
　　3、與正常對(duì)照組相比,酒精灌胃組小鼠肝組織ROS含量顯著上升,T-AOC、GSH、GPx以及GST水平都顯著降低,MDA水平明顯升高,P值均<0.05。而酒精+姜黃素組小鼠肝組織ROS含量以及各項(xiàng)抗氧化、脂質(zhì)過氧化指標(biāo)均恢復(fù)正常。
　　結(jié)論:姜黃素能減輕酒精誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性、抑制血