姜黃素對活性氧所致精子DNA損傷的保護作用.pdf

1、第一章、姜黃素對次黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶所致人精子DNA損傷的保護作用
　　 目的：探討活性氧對精子DNA損傷的機制，研究姜黃素對活性氧(reactiveoxygen species，ROS)所致精子DNA損傷的保護作用，以期尋找一種安全有效的防治精子DNA損傷的藥物。
　　 方法：應(yīng)用體外培養(yǎng)的方法，經(jīng)密度梯度離心法優(yōu)選后的精子作為正常精子模型，采用次黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶(HX-XO)體系產(chǎn)生活性氧(ROS)，然后在有氧

2、環(huán)境下，將不同濃度的姜黃素與之共同孵育后，通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測定精子懸液中ROS含量，采用精子計算機輔助分析法(Computer-aided sperm analysis，CASA)檢測精子活動率，Diff-Quik染色法進行精子形態(tài)分析，通過精子尾部低滲膨脹試驗評估精子膜功能，通過吖啶橙熒光染色測定精子DNA損傷程度，并與已知的抗氧化劑VitC對照。
　　 結(jié)果：姜黃素低、中、高劑量(1、10、100μg/ml

3、)在相同的條件下均可降低精子懸液活性氧(ROS)含量，顯示對ROS所致精子DNA的氧化損傷均具有不同程度的預防作用，對精子膜功能及其精子DNA具有一定的保護作用。姜黃素對精子DNA的保護作用呈雙向性，中劑量(10μg/ml)時作用最顯著。
　　 結(jié)論：
　　 1.在精子體外培養(yǎng)時，培養(yǎng)液中添加適當?shù)目寡趸镌诒苊饩踊盍ο陆岛鸵种凭幽み^氧化損傷方面具有一定作用。
　　 2.姜黃素對活性氧所致人精子DNA具有明顯

4、的保護作用，其作用機制與降低ROS含量、抗脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生有關(guān)。
　　 3.當姜黃素的濃度達到一定濃度時，可從抗氧化劑轉(zhuǎn)換成促氧化作用。
　　 第二章、研究姜黃素對環(huán)磷酰胺所致小鼠精子DNA損傷的保護作用
　　 目的：探討環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)對精子DNA損傷的機制，研究姜黃素對CTX所致精子DNA損傷的保護作用，以期尋找一種安全有效的防治精子DNA損傷的藥物。
　　 方法：

5、選用清潔級昆明雄性小鼠隨機分為6組，其中對照組小鼠每天給予維生素C50mg/kg.d灌胃;姜黃素低、中、高組小鼠每天給予姜黃素混懸液100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg灌胃;正常組小鼠及0mg/kg Cur組予等量的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，各組均連續(xù)處理28天，給藥的同時除了正常組外其余各組均按照40mg/kg.d腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)，連續(xù)5天。末次給藥24 h后采用頸椎脫臼法處死小鼠，處死前1小時給予Br

6、du腹腔注射后，取雙側(cè)睪丸組織及附睪。常規(guī)HE染色切片觀察睪丸細胞形態(tài)學改變及Brdu免疫組化觀察睪丸細胞凋亡情況，制備睪丸組織勻漿檢測超氧化物歧化酶(SOD)含量、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量，制備精子懸液檢測精子活動率、形態(tài)學分析、精子膜功能及精子DNA損傷情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.睪丸組織的病理學觀察光鏡下正常組睪丸生精上皮呈規(guī)則圓形，排列緊密，結(jié)構(gòu)清晰，層次分明

7、，精原細胞大而圓，規(guī)則地緊貼曲細精管的基底膜，向內(nèi)依次為初級精母細胞、精子細胞、精子。0mg/kg Cur組睪丸曲細精管排列稍稀疏，間質(zhì)水腫，管腔內(nèi)各級生精細胞數(shù)量減少，層次減少，排列混亂，初級精母階段不分化，管腔內(nèi)無成熟精子。姜黃素組睪丸的生精功能損傷較輕，可見初級精母細胞、精子細胞、精子。
　　 2.睪丸組織勻漿氧化標志物水平結(jié)果與正常組相比，0mg/kg Cur組睪丸組織中SOD、GSH-Px含量均有明顯降低(P＜0.05

8、)，MDA、ROS含量均有明顯升高(P＜0.01);經(jīng)姜黃素干預后，睪丸組織中SOD、GSH-Px含量均有明顯升高（P＜0.05），MDA、ROS含量均有明顯下降(P＜0.05)。
　　 3.精子的活動率、畸形率、低滲腫脹率比較與正常組相比，0mg/kg Cur組精子活動率、低滲腫脹率均明顯下降（P＜0.05)，精子的畸形率均顯著升高（P＜0.01）:經(jīng)姜黃素干預后，其精子活動率、低滲腫脹率均顯著升高（P＜0.01)，精子的畸形

9、率明顯減低（P＜0.05）。
　　 4.精子DNA完整性的比較與正常組相比，0mg/kg Cur組精子DNA完整性顯著下降（P＜0.05），經(jīng)姜黃素干預后其精子DNA的完整性均明顯提高(P＜0.05)。
　　 5.睪丸組織Brdu免疫組化觀察深棕色為陽性細胞（增殖細胞），0mg/kg Cur組增殖細胞含量明顯少于其它各組，正常組及100，150，200mg/kg Cur處理組可見數(shù)目較多的增殖細胞。
　　 結(jié)論：

10、
　　 1.用腹腔注射環(huán)磷酰胺法建立小鼠睪丸氧化損傷的動物模型;在體內(nèi)可使睪丸組織氧化和抗氧化能力失衡，即抗氧化能力降低，氧自由基堆積。
　　 2.姜黃素可以降低小鼠睪丸局部氧化產(chǎn)物ROS、MDA的生成，并增加抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量，提高組織的抗氧化能力，保護睪丸結(jié)構(gòu)功能。
　　 3.姜黃素可通過對抗脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生保護精子膜的功能，從而提高精子的活動率及精子DNA的完整性。
　　 4.姜黃