HSP27磷酸化對CSE誘導肺氧化應激的保護作用及與γ-GCS表達的相關研究.pdf

1、目的：檢測被動吸煙大鼠肺組織中HSP27表達水平及磷酸化水平。研究香煙煙霧提取物（CSE）處理的大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞（AECⅡ）中HSP27表達水平及磷酸化水平，以及與γ-GCS表達的相關性。
　　方法：本研究分為動物實驗和細胞實驗兩部分。（1）動物實驗部分：40只雄性Wistar大鼠隨機分為四組，分別為對照組、吸煙2個月組、吸煙4個月組和戒煙組（吸煙4個月然后戒煙1個月），復制被動吸煙大鼠模型，收集對照組和實驗組大鼠肺組織標本，

2、Western-blot法檢測各組肺組織中的HSP27表達水平及磷酸化狀態(tài)。（2）細胞實驗部分：酶消化法分離Wistar大鼠AECⅡ并傳代培養(yǎng)，取第3代對數(shù)生長期細胞用于實驗。用0％、2.5%、5%、10%的CSE分別處理大鼠AECⅡ6h、12h，采用Western-blot檢測各組細胞中的HSP27、p-HSP27和γ-GCS的蛋白表達水平，RT-PCR法檢測γ-GCSmRNA的表達水平。再用5%CSE分別對細胞處理0h、6h、12h

3、、24h、48h，采用Western-blot法檢測各組細胞中的HSP27、p-HSP27和γ-GCS的蛋白表達水平，RT-PCR法檢測γ-GCSmRNA的表達水平。
　　結果：⑴動物實驗部分：對照組、吸煙2個月組、吸煙4個月組、戒煙組大鼠肺組織HSP27表達水平分別為0.73±0.01、0.77±0.01、0.78±0.03和0.77±0.01，4組之間無顯著性差異（p>0.05）。吸煙2個月組大鼠肺組織p-HSP27水平顯著高

4、于對照組（0.37±0.02 VS0.14±0.01，p<0.05），吸煙4個月組較吸煙2個月組進一步升高（0.48±0.02 VS0.37±0.02，p<0.05），戒煙組（0.41±0.01）較吸煙4個月組降低（p>0.05），但仍然高于吸煙2個月組（p<0.05）。各組大鼠肺組織HSP27磷酸化比例變化趨勢與p-HSP27水平變化趨勢一致。⑵細胞實驗部分：大鼠AECⅡ分別經(jīng)0%(對照組)、2.5%、5%和10%的CSE處理6h及1

5、2h后，總HSP27及p-HSP27蛋白質(zhì)水平隨CSE濃度升高而升高，各濃度12h處理組的HSP27及p-HSP27蛋白質(zhì)水平均高于6h處理組。大鼠AECⅡ經(jīng)5%CSE分別處理0h（對照組）、6h、12h、24h、48h，HSP27水平分別為0.12±0.01、0.16±0.02、0.23±0.03、0.29±0.01、0.36±0.01，p-HSP27水平分別為0.02±0.00、0.06±0.01、0.13±0.02、0.23±0.

6、03、0.23±0.03，HSP磷酸化比例分別為0.17±0.04、0.39±0.07、0.57±0.09、0.80±0.06、0.64±0.09（其中6h組和12h顯著高于對照組，24h組高于6h組和12h，48h組低于24h但高于6h組和12h，p<0.05）。AECII經(jīng)0、2.5%、5%、10%的CSE處理24h，γ-GCS mRNA表達水平分別為0.21、0.32、0.44、0.54；經(jīng)5%的CSE處理0 h、6 h、12 h

7、、24 h、48h，γ-GCS mRNA的表達水平分別為0.27、0.43、0.50、0.72和0.61。AECⅡ經(jīng)5%的CSE處理0 h、6 h、12 h、24、48h，γ-GCS蛋白表達水平隨處理時間進行性升高，于24小時達到高峰。直線相關分析表明AECⅡγ-GCS mRNA和蛋白表達水平與HSP27、p-HSP27表達水平以及HSP27磷酸化比例成正相關。
　　結論：①HSP27磷酸化參與了被動吸煙大鼠肺內(nèi)抗氧化應激機制。②