HSP27磷酸化對(duì)CSE誘導(dǎo)肺氧化應(yīng)激的保護(hù)作用及與γ-GCS表達(dá)的相關(guān)研究.pdf

1、目的：檢測(cè)被動(dòng)吸煙大鼠肺組織中HSP27表達(dá)水平及磷酸化水平。研究香煙煙霧提取物（CSE）處理的大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞（AECⅡ）中HSP27表達(dá)水平及磷酸化水平，以及與γ-GCS表達(dá)的相關(guān)性。
　　方法：本研究分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩部分。（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：40只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為四組，分別為對(duì)照組、吸煙2個(gè)月組、吸煙4個(gè)月組和戒煙組（吸煙4個(gè)月然后戒煙1個(gè)月），復(fù)制被動(dòng)吸煙大鼠模型，收集對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織標(biāo)本，

2、Western-blot法檢測(cè)各組肺組織中的HSP27表達(dá)水平及磷酸化狀態(tài)。（2）細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分：酶消化法分離Wistar大鼠AECⅡ并傳代培養(yǎng)，取第3代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。用0％、2.5%、5%、10%的CSE分別處理大鼠AECⅡ6h、12h，采用Western-blot檢測(cè)各組細(xì)胞中的HSP27、p-HSP27和γ-GCS的蛋白表達(dá)水平，RT-PCR法檢測(cè)γ-GCSmRNA的表達(dá)水平。再用5%CSE分別對(duì)細(xì)胞處理0h、6h、12h

3、、24h、48h，采用Western-blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中的HSP27、p-HSP27和γ-GCS的蛋白表達(dá)水平，RT-PCR法檢測(cè)γ-GCSmRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：⑴動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：對(duì)照組、吸煙2個(gè)月組、吸煙4個(gè)月組、戒煙組大鼠肺組織HSP27表達(dá)水平分別為0.73±0.01、0.77±0.01、0.78±0.03和0.77±0.01，4組之間無(wú)顯著性差異（p>0.05）。吸煙2個(gè)月組大鼠肺組織p-HSP27水平顯著高

4、于對(duì)照組（0.37±0.02 VS0.14±0.01，p<0.05），吸煙4個(gè)月組較吸煙2個(gè)月組進(jìn)一步升高（0.48±0.02 VS0.37±0.02，p<0.05），戒煙組（0.41±0.01）較吸煙4個(gè)月組降低（p>0.05），但仍然高于吸煙2個(gè)月組（p<0.05）。各組大鼠肺組織HSP27磷酸化比例變化趨勢(shì)與p-HSP27水平變化趨勢(shì)一致。⑵細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分：大鼠AECⅡ分別經(jīng)0%(對(duì)照組)、2.5%、5%和10%的CSE處理6h及1

5、2h后，總HSP27及p-HSP27蛋白質(zhì)水平隨CSE濃度升高而升高，各濃度12h處理組的HSP27及p-HSP27蛋白質(zhì)水平均高于6h處理組。大鼠AECⅡ經(jīng)5%CSE分別處理0h（對(duì)照組）、6h、12h、24h、48h，HSP27水平分別為0.12±0.01、0.16±0.02、0.23±0.03、0.29±0.01、0.36±0.01，p-HSP27水平分別為0.02±0.00、0.06±0.01、0.13±0.02、0.23±0.

6、03、0.23±0.03，HSP磷酸化比例分別為0.17±0.04、0.39±0.07、0.57±0.09、0.80±0.06、0.64±0.09（其中6h組和12h顯著高于對(duì)照組，24h組高于6h組和12h，48h組低于24h但高于6h組和12h，p<0.05）。AECII經(jīng)0、2.5%、5%、10%的CSE處理24h，γ-GCS mRNA表達(dá)水平分別為0.21、0.32、0.44、0.54；經(jīng)5%的CSE處理0 h、6 h、12 h

7、、24 h、48h，γ-GCS mRNA的表達(dá)水平分別為0.27、0.43、0.50、0.72和0.61。AECⅡ經(jīng)5%的CSE處理0 h、6 h、12 h、24、48h，γ-GCS蛋白表達(dá)水平隨處理時(shí)間進(jìn)行性升高，于24小時(shí)達(dá)到高峰。直線相關(guān)分析表明AECⅡγ-GCS mRNA和蛋白表達(dá)水平與HSP27、p-HSP27表達(dá)水平以及HSP27磷酸化比例成正相關(guān)。
　　結(jié)論：①HSP27磷酸化參與了被動(dòng)吸煙大鼠肺內(nèi)抗氧化應(yīng)激機(jī)制。②