Humanin拮抗岡田酸誘導(dǎo)的Tau蛋白過度磷酸化的作用研究.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Humanin拮抗岡田酸誘導(dǎo)的Tau蛋白過度磷酸化的作用研究姓名：王丹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生理學(xué)指導(dǎo)教師：張策20070508元。在單獨(dú)加入不同濃度OA繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，以及提前加入不同濃度HN孵育24小時(shí)后再加入OA，用Westernblot方法檢測tau蛋白磷酸化程度的改變，以及GSK313表達(dá)水平的改變，并通過絲／蘇氨酸蛋白磷酸酶活性檢測試劑盒檢測PP2A活性的變化。結(jié)果：1原代細(xì)胞呈貼壁生長，一天后，

2、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞完全貼壁，形成橢圓形的芽胞狀，周圍有明顯的光暈，細(xì)胞折光性好，活性強(qiáng)。這時(shí)加入阿糖胞苷抑制膠質(zhì)細(xì)胞的生長，并觀察細(xì)胞的增殖情況，依此決定阿糖胞苷的作用時(shí)間，得到純化的神經(jīng)元培養(yǎng)至12天細(xì)胞生長良好，胞漿透明，突起發(fā)育好，隨即加OA處理細(xì)胞。20A誘導(dǎo)的tau蛋白磷酸化及唧的拮抗作用觀察：(1)不同濃度0A對(duì)神經(jīng)元影響的鏡下觀察：加入不同濃度OA繼續(xù)孵育24d時(shí)以后，倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：5riM組細(xì)胞同對(duì)照組相比無明

3、顯改變，細(xì)胞周圍有明顯的光暈，細(xì)胞折光性好，活性強(qiáng)；而10nM組中細(xì)胞突起有明顯回縮，神經(jīng)纖維網(wǎng)絡(luò)也較對(duì)照組減少。20riM組中多數(shù)細(xì)胞胞體呈圓形，突起消失明顯，死細(xì)胞明顯增多。(2)OA對(duì)tau蛋白磷酸化的檢測：OA處理以后，利用免疫印跡對(duì)大鼠皮層神經(jīng)元中tau蛋白不同位點(diǎn)的磷酸化進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)tau蛋白在絲氨酸396、199／202及蘇氨酸231位點(diǎn)上出現(xiàn)過度磷酸化。其中5nMOA組磷酸化水平與對(duì)照組比較無顯著性差異(尸005)