不同藥物對(duì)香煙誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：(1)研究地塞米松、氨茶堿、鹽酸氨溴索和紅霉素對(duì)經(jīng)香煙預(yù)處理的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1和c-fosmRNA及其蛋白表達(dá)的影響，探討這幾種藥物在慢性阻塞性肺疾病抗氧化治療中的作用機(jī)制。 (2)研究TGF-β1對(duì)經(jīng)香煙預(yù)處理的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞γ-GCS和c-fosmRNA及其蛋白表達(dá)的影響，探討TGF-β1在慢性阻塞性肺疾病氧化/抗氧化失衡中的作用機(jī)制。 方法

2、：(1)通過(guò)支氣管肺泡灌洗(BAL)獲取大鼠肺泡巨噬細(xì)胞，隨機(jī)分為6組：對(duì)照組、香煙組、地塞米松組、氨茶堿組、沐舒坦組和紅霉素組。后4組分別加入地塞米松、氨茶堿、鹽酸氨溴索(沐舒坦)和紅霉素，使其終濃度分別為2.5μg/ml、20μg/ml、11μmol/ml和5μg/ml。2小時(shí)后除對(duì)照組外，每組均加入香煙煙霧提取物(CSE)，對(duì)照組加入磷酸鹽緩沖液(PBS)。于24、48和12小時(shí)收取細(xì)胞爬片，采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法分別檢測(cè)肺泡巨噬細(xì)

3、胞中γ-GCS-HS、TGF-β1及c-fos蛋白表達(dá)水平。于18、36和6小時(shí)收取細(xì)胞爬片，采用原位雜交方法分別檢測(cè)肺泡巨噬細(xì)胞中γ-GCS-HS、TGF-β1及c-fosmRNA表達(dá)水平。 (2)BAL獲取大鼠肺泡巨噬細(xì)胞，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、香煙組和TGF-β1組。TGF-β1組加入終濃度為3ng/ml的TGF-β1，2小時(shí)后除對(duì)照組外，余兩組均加入CSE，對(duì)照組加入PBS。于20、10小時(shí)收取細(xì)胞爬片，采取免疫細(xì)胞化學(xué)

4、方法分別檢測(cè)肺泡巨噬細(xì)胞中γ-GCS-HS及c-fos蛋白的表達(dá)。于10、5小時(shí)提取細(xì)胞總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法分別檢測(cè)肺泡巨噬細(xì)胞中γ-GCS-HS及c-fosmRNA的表達(dá)。 結(jié)果：(1)香煙對(duì)γ-GCS、TGF-β1和c-fosmRNA及其蛋白表達(dá)的影響：與對(duì)照組(0.206±0.006，0.163±0.019；0.219±0.015，0.190±0.002；0.518±0.031，0.341

5、±0.054)比較，香煙組γ-GCS(0.493±0.090，0.468±0.065)、TGF-β1(0.412±0.017，0.280±0.018)和c-fos(1.369±0.150，1.121±0.124)mRNA及其蛋白的表達(dá)水平明顯增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均＜0.01。 (2)地塞米松對(duì)γ-GCS、TGF-β1和c-fosmRNA及其蛋白表達(dá)的影響：與香煙組(0.493±0.090，0.468±0.065；0.412

6、±0.017，0.280±0.018；1.369±0.150，1.121±0.124)比較，地塞米松組γ-GCS(0.370±0.818，0.314±0.085)、TGF-β1(0.363±0.060，0.212±0.009)和c-fos(0.983±0.081，0.595±0.399)mRNA及其蛋白的表達(dá)水平明顯降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均＜0.01。 (3)紅霉素對(duì)γ-GCS、TGF-β1和c-fosmRNA及其蛋白表達(dá)的

7、影響：與香煙組(0.493±0.090，0.468±0.065；0.412±0.017，0.280±0.018；1.369±0.150，1.121±0.124)比較，紅霉素組TGF-β1(0.229±0.034，0.207±0.006)、c-fos(0.970±0.206，0.706±0.089)mRNA及其蛋白和γ-GCS(0.300±0.047)mRNA表達(dá)水平明顯降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均＜0.01。而γ-GCS(0.420±0

8、.001)蛋白表達(dá)水平與CSE組相比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。 (4)氨茶堿、沐舒坦對(duì)γ-GCS、TGF-β1和c-fosmRNA及其蛋白表達(dá)的影響：與香煙組(0.493±0.090，0.468±0.065；0.412±0.017，0.280±0.018；1.369±0.150，1.121±0.124)比較，氨茶堿組γ-GCS(0.442±0.642，0.454±0.005)、TGF-β1(0.394±0.012，0.2

9、58±0.020)和c-fos(1.083±0.239，0.790±0.122)；沐舒坦組γ-GCS(0.423±0.610，0.469±0.107)、TGF-β1(0.376±0.021，0.264±0.016)和c-fos(1.155±0.384，0.939±0.122)mRNA及其蛋白表達(dá)，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均＞0.05。 (5)TGF-β1對(duì)γ-GCS和c-fosmRNA及其蛋白表達(dá)的影響：與香煙組(0.719±0.0

10、03，0.586±0.021；0.637±0.005，0.705±0.345)相比，TGF-β1組γ-GCS(0.361±0.007，0.402±0.002)mRNA及其蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異有顯著性，P均＜0.01；而c-fos(1.243±0.004，1.121±0.124)mRNA及其蛋白表達(dá)水平明顯升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均＜0.01。 結(jié)論：1.香煙煙霧提取物可使γ-GCS-HS、TGF-β1及c-fosmRNA