山葵內(nèi)生真菌的分離鑒定及防治墨入病的研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌是一類具有重要價(jià)值的資源微生物，在促進(jìn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和醫(yī)藥領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景。試驗(yàn)采用組織塊分離法分離山葵根、葉柄以及葉片中的內(nèi)生真菌，經(jīng)嚴(yán)格的表面消毒程序，共獲得29株內(nèi)生真菌。以形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合分子生物學(xué)方法進(jìn)行分類鑒定，并分析了不同部位內(nèi)生真菌的多樣性以及種群分布規(guī)律。通過(guò)平板對(duì)峙和抑制菌絲生長(zhǎng)試驗(yàn)篩選對(duì)山葵墨入病菌抑制率高的菌株，測(cè)定高活性菌株的生物學(xué)特性。在溫室和田間小區(qū)內(nèi)，通過(guò)噴霧處理進(jìn)一步測(cè)定高活性菌株對(duì)

2、墨入病的防治效果。主要結(jié)果如下:
　　1、比較山葵葉、葉柄及根的表面消毒條件，我們得出，山葵的根用75％的酒精消毒30s，3.5％的NaClO消毒5min、山葵的葉和葉柄用75％的酒精消毒30s，3.5％的NaC1O消毒3min后，表面消毒效果最好，可獲得內(nèi)生真菌較好的分離效果。
　　2、通過(guò)顯微形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法，將山葵內(nèi)生真菌初步鑒定為6日、8科、8屬。從葉片中分離出內(nèi)生真菌13株，其中包括7個(gè)種屬，分別為Colle

3、totrichum sp.，Chaetomium sp.,Fusarium sp., Arthrinium sp.，Penicillium sp., Alternaria sp., Mucorsp.。從葉柄中分離出內(nèi)生真菌5株，其中包括3個(gè)種屬，分別為Fusarium sp.，Penicilliumsp.，Alternaria sp.。從根中分離到內(nèi)生真菌11株，其中包括6個(gè)屬，分別為Colletotrichumsp.,Chaetomi

4、um sp.，F(xiàn)usariumsp.,Penicillium sp.,Alternaria sp.,Xylaria sp.。采用4℃斜面保存以及-20℃甘油保存純培養(yǎng)物。
　　3、利用平板對(duì)峙培養(yǎng)，將所有分離物與山葵墨入病菌(Phoma wasabiae Yokogi)菌株進(jìn)行拮抗性測(cè)定，結(jié)果得到對(duì)山葵墨入菌具有抑制作用的內(nèi)生真菌10株。其中，菌株SK26的抑菌半徑最大，為2.82cm。采用抑制菌絲生長(zhǎng)法對(duì)初篩的10株拮抗內(nèi)生菌進(jìn)

5、行復(fù)篩，結(jié)果測(cè)得菌株SK26發(fā)酵原液對(duì)山葵墨入病菌菌絲生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制作用，抑制率達(dá)77.39％。結(jié)合培養(yǎng)形態(tài)特征和分子生物學(xué)分析，將菌株SK26初步鑒定為子囊菌亞門(mén)、核菌綱、球殼菌目、黑孢殼科中的球毛殼(chaetomium globosum)真菌。SK26發(fā)酵原液對(duì)熱處理和紫外照射處理具有很好的穩(wěn)定性，不耐酸堿，僅在中性偏酸環(huán)境下較為穩(wěn)定。溫室生防試驗(yàn)結(jié)果表明:SK26拮抗內(nèi)生真菌的孢懸液對(duì)山葵墨入病的防治效果較好，防效為66.1

6、8％，SK26的發(fā)酵液對(duì)山葵墨入病的防治效果較差，僅為21.56％。田間小區(qū)試驗(yàn)初步表明:田間施藥三次后SK26孢懸液對(duì)山葵墨入病的防效為57.21％，發(fā)酵液處理的防效29.87％。內(nèi)生真菌SK26不管是孢懸液還是發(fā)酵液在施藥后病情指數(shù)都有所上升，但較對(duì)照上升得不顯著，對(duì)墨入病的防治起到一定控制性的效果。
　　4、SK26菌株的基礎(chǔ)生物學(xué)特性研究表明，最適菌絲生長(zhǎng)溫度為25℃，最適產(chǎn)孢溫度為30℃;最適菌絲生長(zhǎng)pH為7，最適產(chǎn)孢P