山葵黑根病菌拮抗菌的篩選、鑒定及防治研究.pdf

1、山葵，屬十字花科多年生草本植物，產(chǎn)于日本富士山和臺(tái)灣阿里山，是生產(chǎn)芥末的主要原料，沿海人們喜食生魚(yú)片，以芥末為佐餐，被日本人民稱(chēng)為生活必需品。美國(guó)，加拿大，澳洲也有出口，因此市場(chǎng)銷(xiāo)售量大。近年國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)：山葵還具有殺菌防病、防腐利尿、發(fā)汗、清血、增進(jìn)食欲、減脂和軟化血管的功能，從而更增加了山葵的需求。因此，種植山葵有很好的經(jīng)濟(jì)社會(huì)效益。近年山葵已在大陸大量種植，我省青城、邛崍、雅安、樂(lè)山、綿陽(yáng)、涼山等地區(qū)都建有種植基地，全國(guó)種植面積不

2、下數(shù)十萬(wàn)畝。但其植株被一種黑根病感染，黑根病病原菌為一種絲狀真菌——墨入菌(Phoma wasabiae Yokogi)引起。凡感染黑根病的山葵其產(chǎn)值下降50％以上。 本研究用稀釋分離法對(duì)成都、簡(jiǎn)陽(yáng)、雅安等地區(qū)的農(nóng)田、自然保護(hù)區(qū)的13個(gè)土壤樣品進(jìn)行放線(xiàn)菌和細(xì)菌的分離，共分離到放線(xiàn)菌119株，細(xì)菌67株。以山葵墨入菌為供試菌，采用點(diǎn)對(duì)峙培養(yǎng)篩選法對(duì)分離到的101株放線(xiàn)菌，57株細(xì)菌進(jìn)行初篩，結(jié)果顯示，對(duì)山葵墨入菌具有拮抗活性的放線(xiàn)

3、菌38株，細(xì)菌10株。再通過(guò)打孔法復(fù)篩，得到產(chǎn)生抑菌圈最大的菌株SA2。 根據(jù)傳統(tǒng)的表型分類(lèi)、生理分類(lèi)，化學(xué)分類(lèi)和現(xiàn)代16S rDNA序列分析的分子分類(lèi)方法，即多相分類(lèi)，對(duì)拮抗菌株SA2進(jìn)行形態(tài)特征，生理生化特征分析以及16S rDNA序列分析。SA2為產(chǎn)芽胞細(xì)菌，周身鞭毛，芽胞中生，橢圓形，菌呈短桿狀，菌體長(zhǎng)1.9-2.8μm，寬0.6-1.1μm，具有運(yùn)動(dòng)性。LB培養(yǎng)基斜面30℃培養(yǎng)72h后，菌落呈乳白色，產(chǎn)生折皺。以16S

4、 rDNA序列為基礎(chǔ)構(gòu)建了包括14株相關(guān)種屬細(xì)菌在內(nèi)的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，其中，與芽孢桿菌屬細(xì)菌有很高的同源性(92％-98.3％)，與蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)十分接近，序列相似性值98.3％。 通過(guò)對(duì)平板對(duì)峙篩選的最強(qiáng)拮抗菌S11，S13，SA2，SA16進(jìn)行室內(nèi)盆栽試驗(yàn)，選取盆栽試驗(yàn)效果最好的菌株SA2進(jìn)行田間試驗(yàn)。試驗(yàn)地選在成都市都江堰龍池鎮(zhèn)的山葵種植場(chǎng)黑根病發(fā)病率在50％以上的場(chǎng)地。盆栽試驗(yàn)