紅景天甙對乙醛刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞Wnt信號通路的影響及其意義.pdf

1、目的：肝纖維化是各種慢性肝病發(fā)展到肝硬化的中間可逆階段。在肝纖維化的病程中,肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells HSCs)的活化是其核心環(huán)節(jié),因此對肝星狀細(xì)胞的活化進(jìn)行干預(yù)是臨床治療肝纖維化的發(fā)展方向。由于肝星狀細(xì)胞的活化涉及眾多的細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路,因此了解肝星狀細(xì)胞的活化中各種信號通路的作用機(jī)制十分重要。引起肝星狀細(xì)胞活化的病因很多,乙醛是酒精性肝病中作用于HSCs的致病因子,將乙醛作為HSCs的激活劑在各種實(shí)驗(yàn)

2、中廣泛運(yùn)用。乙醛刺激大鼠HSCs活化的主要特點(diǎn)是增殖速度增快和包括α1膠原(α1(Ⅰ)collagen)在內(nèi)的細(xì)胞基質(zhì)分泌增多。在前期的實(shí)驗(yàn)中,紅景天甙已經(jīng)被證實(shí)可以影響肝星狀細(xì)胞活化過程中的TGFβ-Smad和Rho-ROCK信號通路從而抑制HSCs的激活和過量細(xì)胞基質(zhì)的產(chǎn)生,但是對其抑制HSCs增殖的具體分子機(jī)制仍然不是很明確。近年對Wnt信號通路的研究發(fā)現(xiàn):它通過對目的基因MYC、CyclinD1等的轉(zhuǎn)錄調(diào)控影響細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化,

3、并與肝星狀細(xì)胞的活化密切相關(guān)。因此了解紅景天甙對活化的肝星狀細(xì)胞中Wnt信號通路和細(xì)胞活性的影響對研究紅景天甙的藥理作用和治療肝纖維化的分子機(jī)理具重要意義。本研究項(xiàng)目通過觀察紅景天甙處理乙醛刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞生長速度的變化以及細(xì)胞中Wnt信號通路中主要下游分子及目的基因mRNA表達(dá)和蛋白水平的改變,探討Wnt信號通路在肝星狀細(xì)胞活化中的作用。
　　 方法用紅景天甙和乙醛處理體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞,同時用正常培養(yǎng)細(xì)胞和單以乙醛

4、刺激的細(xì)胞為對照[1],由MTT法繪制細(xì)胞生長曲線并對比,采用RT-PCR和Western-blot的方法分別從mRNA水平和蛋白水平觀察Wnt信號通路相關(guān)指標(biāo)β-catenin和細(xì)胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表達(dá)變化,并用統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行對比分析。
　　 結(jié)果從各組細(xì)胞生長曲線的對比可以清晰發(fā)現(xiàn):單用乙醛刺激可使大鼠肝星狀細(xì)胞增殖速度增快,紅景天甙可以明顯降低大鼠肝星狀細(xì)胞在乙醛刺激后的生長和增殖速度。運(yùn)用RT-PCR和W

5、estern-blot的方法,在單用乙醛組的大鼠肝星狀細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)Ⅰ型膠原[2]、Wnt信號通路中β-catenin(β-鏈蛋白)和細(xì)胞周期蛋白D1(cyclinD1)的mRNA表達(dá)和蛋白合成相對于正常細(xì)胞均增強(qiáng)(P＜0.05),在紅景天甙處理組的大鼠肝星狀細(xì)胞中,細(xì)胞周期蛋白D1(cyclinD1)和β-catenin(β-鏈蛋白)的mRNA表達(dá)和蛋白合成相較于單用乙醛組均出現(xiàn)不同程度的下降(P＜0.05)。
　　 結(jié)論 Wn