硫化氫對(duì)氧應(yīng)激下大鼠肝星狀細(xì)胞MAPK信號(hào)通路影響的研究.pdf

1、目的：肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）的增殖與激活作為肝纖維化發(fā)生發(fā)展的主要環(huán)節(jié)之一，各種不同的因素激活HSC，并使細(xì)胞外基質(zhì)大量的形成并沉積后，導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生。所以降低自我放大效應(yīng)和活化后機(jī)體損傷是治療肝纖維化的重點(diǎn)。硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）作為一種氣體信號(hào)分子是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的，在循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生中具有重要的作用，具有多種生理功能。為了研究H2S與肝纖維化之間所存

2、在的關(guān)系，利用鐵超載的方法建立氧應(yīng)激模型，在體外復(fù)制肝纖維化，給予H2S的供體硫氫化鈉（sodium hydrosulfide，NaHS）和內(nèi)源性H2S作用的KATP通道阻滯劑格列苯脲（glibenclamide，GLBN），通過(guò)檢測(cè)硫化氫對(duì)氧應(yīng)激下大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）MAPK信號(hào)通路影響，驗(yàn)證氧應(yīng)激下硫化氫對(duì)HSC細(xì)胞具有保護(hù)作用的假說(shuō)。
　　方法：將大鼠肝星狀細(xì)胞分為6組：空白組（B組，HSC-T6）；氧化應(yīng)激模型組

3、(C組，B組+500μmol/L Fe-NTA)；N1組(C組+100μmol/L NaHS)；N2組（C組+200μmol/L NaSH）；N3組（C組+400μmol/L NaHS）；格列苯脲組（GLBN組，C組＋200μmol/L）。用鐵超載的方法復(fù)制HSC氧化應(yīng)激模型，RT-PCR和Western Blot檢測(cè)p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK在24h和48h時(shí)的mRNA和蛋白質(zhì)水平變化。
　　結(jié)果

4、：在氧應(yīng)激模型下，給予FeNTA24和48h時(shí)以后，模型組p38、ERK和JNK mRNA水平與空白組比較均升高明顯(P<0.05)。給予100、200、400μmol/L NaHS處理后三組的p38 mRNA水平和C組比較，表達(dá)逐漸降低，差異顯著(P<0.05)，三個(gè)不同濃度的組間相比較差異顯著(P<0.05)。GLBN組的p38 mRNA表達(dá)水平有所上升，差異顯著(P<0.05)。然而，ERK和JNK mRNA水平在給予不同濃度Na

5、HS處理的N1組、N2組、N3組的ERK和JNK mRNA水平和模型組比較時(shí)，無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，三組不同濃度間的組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。加入格列苯脲后，ERK和JNKmRNA表達(dá)水平無(wú)明顯變化。
　　在蛋白質(zhì)水平，p-p38、p-ERK、p-JNK模型組與空白組比較均升高明顯(P<0.05)。給予100、200、400μmol/LNaHS處理后三組的p-p38蛋白質(zhì)表達(dá)水平和C組比較，逐

6、漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，經(jīng)上述不同濃度NaHS處理后的三個(gè)組間相比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GLBN組，p38蛋白質(zhì)表達(dá)水平有所上升，但低于C組。然而，模型組（p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK）蛋白質(zhì)水平與空白組相比較無(wú)明顯變化(P>0.05)。給予100、200、400μmol/L NaHS處理后三組的p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白質(zhì)水平和模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(