平邑甜茶MhMAPK基因的分離、功能鑒定及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用.pdf

1、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)是MAPK級聯(lián)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵酶，在植物生長發(fā)育和脅迫信號傳遞中起重要作用。平邑甜茶(Malus hupehensis (Pamp)Rehd.var pinyiensisJiang)是蘋果常用砧木，本文以平邑甜茶為試材，克隆了MAPK基因全長、分析了其基因序列與編碼蛋白，還研究了脅迫下MAPK基因表達(dá)與蛋白活性，主要結(jié)果如下：

2、1.利用RT-PCR技術(shù)結(jié)合RACE技術(shù)獲得了平邑甜茶MAPK基因，命名為MhMAPK。GenBank注冊號為EF427897。 2.MhMAPK編碼的蛋白質(zhì)特性分析表明，該蛋白具有MAPK蛋白的典型結(jié)構(gòu)，即含有11個(gè)保守的蛋白激酶亞區(qū)，在第Ⅶ和第Ⅷ個(gè)亞區(qū)之間有一個(gè)非常保守的TxY基序，并且含有蛋白激酶所具有的結(jié)構(gòu)域。 3.構(gòu)建了pBIN-GFP-MhMAPK表達(dá)載體并使其在洋蔥表皮中表達(dá)，結(jié)果表明，MhMAPK定位在細(xì)

3、胞核內(nèi)，同時(shí)利用ProtComp Version 6.1軟件分析的結(jié)果也表明該蛋白定位于細(xì)胞核內(nèi)。 4.構(gòu)建了pBI121-MhMAPK正義表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，并對煙草進(jìn)行了農(nóng)桿菌侵染，獲得了轉(zhuǎn)基因煙草植株。此外，還構(gòu)建了pBI121-3’segment反義表達(dá)載體，從而為轉(zhuǎn)反義基因提供了基礎(chǔ)。 5.鹽脅迫、干旱脅迫、CdCl2和CuCl2脅迫以及SNP(NO供體)均能顯著提高M(jìn)hMAPK基因的表達(dá)量，并