丹參對內(nèi)皮細(xì)胞功能改善中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控作用.pdf

1、揭示現(xiàn)代中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)、配伍規(guī)律和作用機(jī)制是中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中有待解決的關(guān)鍵科學(xué)問題.本文以傳統(tǒng)中藥丹參為例,以體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為模型,考察丹參對內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng),特別是對內(nèi)皮細(xì)胞功能有重要影響的黏附特性、屏障功能的調(diào)節(jié),并對相關(guān)的信號分子進(jìn)行了同步觀察,從分子水平研究了丹參提取物及其活性成分對血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng).采用虎紅染色法研究了丹參提取物(ESM)預(yù)孵內(nèi)皮細(xì)胞對腫瘤壞死因子(TNF-α)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞與

2、白細(xì)胞黏附的抑制作用,利用ELISA、Westernblotting和免疫組化技術(shù)觀察了ESM預(yù)孵對TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)及核轉(zhuǎn)錄因子(NF-кB)活化的影響.結(jié)果表明ESM顯著抑制TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)上調(diào)；抑制核因子抑制蛋白(IкB)降解,進(jìn)而阻止NF-кB的活化,因此推測ESM抑制黏附分子表達(dá)上調(diào)與它抑制NF-кB活化有關(guān). 采用Transwell小室內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞的方法,考察了ESM和其中的主要活

3、性成分丹參素(DSS)、丹酚酸B(Sal B)和原兒茶醛對TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性的影響.結(jié)果表明ESM和DSS、Sal B明顯抑制TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮通透性增加；研究還發(fā)現(xiàn)使用單體成分DSS、Sal B的效果不如ESM,說明ESM中各成分之間可能具有協(xié)同作用.這有利于臨床上相對減少中藥使用劑量,降低藥物的毒副作用,而這正體現(xiàn)了中藥的優(yōu)勢. 考察了ESM及其活性成分對內(nèi)皮單層通透性調(diào)節(jié)有關(guān)的跨膜連接蛋白(VE-cad

4、herin)和胞內(nèi)蛋白β-catenin及相關(guān)的信號分子,如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)的調(diào)控效應(yīng),以探討其中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑.結(jié)果表明ESM和活性成分DSS、Sal B顯著降低TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞VEGF分泌；抑制ERK活化；降低VE-cadherin和β-catenin的磷酸化水平；阻止β-catenin與細(xì)胞骨架脫離,因此推測ESM及其活性成分對內(nèi)皮屏障功能的保護(hù)作用是其抑制ERK活化,降低V