大麻素I型受體參與異氟醚預(yù)處理誘導(dǎo)的大鼠腦缺血耐受.pdf

1、缺血性腦卒中是由于各種原因所致的局部腦組織區(qū)域血液供應(yīng)障礙,引起腦組織缺血缺氧性病變壞死,進(jìn)一步導(dǎo)致引起神經(jīng)功能缺失的腦血管性疾病。在發(fā)達(dá)國(guó)家中,缺血性腦卒中是僅次于缺血性心臟病的第二大死亡原因。我們國(guó)家現(xiàn)存腦卒中病人800多萬,其中主要是缺血性腦卒中,而每年仍以8.7％的速度上升;腦卒中每年給我國(guó)帶來的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)多達(dá)400億元。在過去二十年,雖然在缺血性腦卒中的診斷和治療上都取得了不少的進(jìn)步,但是其死亡率仍然居高不下。這主要是由于缺

2、血性中風(fēng)發(fā)病急,早期的溶栓治療時(shí)間窗有限,很多病人并不能得到及時(shí)有效的治療。因此缺血性腦卒中的損傷機(jī)制和防治研究一直是神經(jīng)科學(xué)的熱點(diǎn)問題。
　　預(yù)處理概念的提出為神經(jīng)保護(hù)作用的研究開辟了一條嶄新的道路。早在90年代,Kitagawa等研究發(fā)現(xiàn),缺血預(yù)處理可以誘導(dǎo)腦缺血耐受,產(chǎn)生腦保護(hù)作用。隨后人們又研究發(fā)現(xiàn),許多藥物(如LPS、TNF-α、IL-1)都可以模擬缺血預(yù)處理,產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用。然而,由于這些方法本身的局限性,使它們不能

3、廣泛應(yīng)用于臨床。異氟醚是一種臨床廣泛應(yīng)用、安全性較好的吸入性麻醉劑。自從Newberg在實(shí)驗(yàn)中首次發(fā)現(xiàn)異氟醚可以降低大腦耗氧量,產(chǎn)生腦保護(hù)作用以來,異氟醚預(yù)處理的中樞神經(jīng)保護(hù)作用已經(jīng)被大量研究證實(shí),然而它的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制仍不清楚。
　　內(nèi)源性大麻素是機(jī)體對(duì)抗興奮性毒性損傷第一道防線的重要組成部分。在動(dòng)物腦損傷模型中發(fā)現(xiàn),給予內(nèi)源性大麻素或大麻素受體激動(dòng)劑可以產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用,而選擇性大麻素I型受體(CB1)受體拮抗劑AM251可以逆

4、轉(zhuǎn)這種保護(hù)作用。并且CB1受體作為含量最豐富的神經(jīng)調(diào)節(jié)受體之一,在腦組織中有著廣泛的表達(dá)。以往研究發(fā)現(xiàn)Ca2+內(nèi)流可以啟動(dòng)內(nèi)源性大麻素的合成,而異氟醚預(yù)處理可以增加神經(jīng)元內(nèi)Ca2+的內(nèi)流。這些提示我們,異氟醚預(yù)處理可能促進(jìn)內(nèi)源性大麻素的合成。
　　因此,我們推測(cè):(1)異氟醚預(yù)處理可以上調(diào)腦組織CB1受體的表達(dá);(2)CB1受體可能參與了異氟醚預(yù)處理誘導(dǎo)的腦缺血耐受。
　　目的:以大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型為基礎(chǔ),探

5、討CB1受體在異氟醚預(yù)處理神經(jīng)保護(hù)中的作用。
　　方法:(1)SpragueDawley(SD)大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和異氟醚預(yù)處理組,通過免疫熒光染色法和Westernblot方法檢測(cè)兩組動(dòng)物腦組織中CB1的分泌和和表達(dá)變化情況;檢測(cè)MCAO2h再灌24h后兩組腦梗死容積和神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。(2)48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組:假手術(shù)組:僅暴露頸總動(dòng)脈,不結(jié)扎血管;單純?nèi)毖M:阻塞大鼠大腦中動(dòng)脈2h;異氟醚預(yù)處理組:大鼠吸入異氟醚(1

6、.5%)1h/d,連續(xù)5d;溶劑+異氟醚預(yù)處理組和CB1受體拮抗劑+異氟醚預(yù)處理組:每日在吸入異氟醚前30min分別給予溶劑3mL/kg(i.p.)和AM2511mg/kg(i.p.),連續(xù)5d;CB1受體拮抗劑+單純?nèi)毖M:每日腹腔注射(i.p.)AM2511mg/kg,連續(xù)5d。除假手術(shù)組外其余各組均在最后一次預(yù)處理24h后行頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法致大腦中動(dòng)脈阻塞(2h)模型,觀察再灌注后24h神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,然后取大腦行2,3,5-氯化三

7、苯四唑(TTC)染色以計(jì)算腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果:(1)Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,異氟醚預(yù)處理組大鼠海馬組織CB1受體表達(dá)量明顯升高(P<0.05);MCAO后異氟醚預(yù)處理組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯高于對(duì)照組,異氟醚預(yù)處理組腦梗死容積顯著小于對(duì)照組。(2)假手術(shù)組神經(jīng)行為學(xué)正常且未見梗死灶;異氟醚預(yù)處理組和溶劑+異氟醚組預(yù)處理組腦梗死體積百分比明顯小于對(duì)照組、拮抗劑組和拮抗劑+異氟醚預(yù)處理組(P<0.05)

8、;神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分異氟醚預(yù)處理組和溶劑+異氟醚預(yù)處理組明顯高于對(duì)照組、拮抗劑組和拮抗劑+異氟醚預(yù)處理組(P<0.05);而拮抗劑組、拮抗劑+異氟醚預(yù)處理組與對(duì)照組之間神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分和腦梗死體積百分比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:通過對(duì)大鼠連續(xù)5d異氟醚的吸入,可以顯著提高腦組織中CB1受體的表達(dá)量;MCAO后,異氟醚預(yù)處理可以減少腦梗死容積,提高神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分,而這種保護(hù)作用被AM251所逆轉(zhuǎn)。CB1可能參與了異氟醚預(yù)處理誘導(dǎo)的腦缺血