內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)參與電針預(yù)處理誘導(dǎo)的腦缺血耐受.pdf

1、缺血性腦損傷是近年來導(dǎo)致殘疾和死亡的最常見原因之一，而現(xiàn)在臨床上針對(duì)這種致殘性疾病的藥物治療效果還十分有限。尋找一種有效的、對(duì)人體傷害小的、易被患者接受的預(yù)處理方法無疑具有十分重要的意義。電針不僅繼承了傳統(tǒng)針刺激治療的優(yōu)點(diǎn)，而且還融合了電刺激的生理效應(yīng)，具有簡單易行、安全可靠、患者易接受等優(yōu)點(diǎn)，其對(duì)腦缺血的治療作用已被較多的臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所證實(shí)。我們以往的研究證實(shí)，重復(fù)電針刺激百會(huì)穴預(yù)處理具有神經(jīng)保護(hù)作用，能夠減輕隨后的缺血性腦損傷，明

2、顯減少大腦梗死容積，顯著改善大鼠的神經(jīng)功能損害程度，具有較明顯的腦缺血損傷保護(hù)作用[1]。這種作用是由腦啡肽的釋放并作用于δ和μ受體介導(dǎo)的[2]。研究發(fā)現(xiàn)，大麻素與阿片類物質(zhì)的神經(jīng)傳遞之間存在交互作用，并具有相似的藥理學(xué)作用：都能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、低體溫和低血壓以及免疫抑制等效應(yīng)[3,4]。此外，心臟研究中發(fā)現(xiàn)，缺血前給予內(nèi)源性大麻素能夠模擬缺血預(yù)處理的神經(jīng)保護(hù)作用[5]，并且，在活體和離體試驗(yàn)中都已證實(shí)內(nèi)源性和外源性大麻素都能夠?qū)?/p>

3、抗多種類型的急性神經(jīng)元損傷，具有神經(jīng)保護(hù)作用[6-9]。這些結(jié)果表明，內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)參與了電針預(yù)處理誘導(dǎo)的腦保護(hù)作用。因此，本研究擬探討內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)是否參與了電針預(yù)處理誘導(dǎo)的腦缺血耐受。
　　第一部分電針刺激百會(huì)穴預(yù)處理對(duì)內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)的影響
　　方法
　　1.單次電針預(yù)處理對(duì)大鼠腦內(nèi)內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)的影響
　　健康雄性SD大鼠(280～320g)，隨機(jī)分為3組：Sham組、SP組和EA組。Sham組未行

4、任何處理，SP組僅腹腔注射(ip)戊巴比妥鈉40mg/kg。EA組在腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉下電針刺激百會(huì)穴30min。電針預(yù)處理后2h進(jìn)行CB1受體與NeuN免疫雙重?zé)晒馊旧皟?nèi)源性大麻素含量測定；電針預(yù)處理后30min、1h和2h行CB1受體RT-PCR和Westernblot檢測。
　　2.重復(fù)電針預(yù)處理對(duì)大鼠腦內(nèi)內(nèi)源性大麻素的影響
　　健康雄性SD大鼠(280～320g)，隨機(jī)分為4組：Sham-2組、E

5、A-2組、Sham-24組和EA-24組。Sham-2組和Sham-24組僅每天腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg，連續(xù)5d。EA-2組和EA-24組每天在戊巴比妥鈉40mg/kg(ip)麻醉下電針刺激百會(huì)穴30min，連續(xù)5d。Sham-2組和EA-2組大鼠在最后一次電針預(yù)處理2h后，Sham-24組和EA-24組在最后一次電針預(yù)處理24h后深麻醉斷頭處死，檢測內(nèi)源性大麻素含量。
　　結(jié)果
　　1．單次電針預(yù)處理對(duì)大鼠腦內(nèi)內(nèi)

6、源性大麻素系統(tǒng)的影響
　　1.1CB1受體與NeuN免疫雙重?zé)晒馊旧?br>　　與Sham組和SP組相比，電針預(yù)處理顯著上調(diào)了右側(cè)半腦CB1受體的表達(dá)。CB1受體與NeuN免疫雙重?zé)晒馊旧砻鰿B1受體主要表達(dá)于神經(jīng)元。電針預(yù)處理后2h，CB1受體表達(dá)增強(qiáng)，并與NeuN表達(dá)相重合。
　　1.2CB1受體mRNA表達(dá)
　　與Sham組和SP組相比，電針預(yù)處理結(jié)束后30min和60min，CB1受體mRNA表達(dá)均顯著升高，

7、而電針結(jié)束后120min則回降至Sham組水平。
　　1.3CB1受體蛋白含量
　　Westernblot條帶分析結(jié)果顯示，與Sham組和SP組相比，電針預(yù)處理顯著提高了電針后120min時(shí)CB1受體蛋白含量。
　　1.4內(nèi)源性大麻素含量
　　與Sham組和SP組相比，單次電針預(yù)處理顯著上調(diào)了右側(cè)半腦內(nèi)源性大麻素AEA和2-AG的含量。
　　2.重復(fù)電針預(yù)處理對(duì)大鼠腦內(nèi)內(nèi)源性大麻素的影響
　　重復(fù)電針

8、預(yù)處理顯著上調(diào)了右側(cè)半腦內(nèi)源性大麻素的含量。AEA和2-AG含量在電針預(yù)處理后2h均顯著升高，在24h時(shí)AEA含量仍維持在較高水平，而2-AG含量下降至對(duì)照組水平。
　　第二部分內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在電針預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受中的作用
　　方法
　　1.CB1受體參與單次電針預(yù)處理誘導(dǎo)的大鼠腦缺血耐受
　　健康雄性SD大鼠(280～320g)，均在MCAO前2.5h腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉，并隨機(jī)分為5組：

9、Con組、EA-MCAO組、AM-EA-MCAO組、v-EA-MCAO組和AM-MCAO組。Con組僅行頸內(nèi)動(dòng)脈尼龍線線栓法致MCAO模型；EA-MCAO組在電針刺激百會(huì)穴30min后2h時(shí)行MCAO；AM-MCAO組在MCAO前3h腹腔注射AM2511mg/kg；v-EA-MCAO組和AM-EA-MCAO組在電針預(yù)處理前30min分別腹腔注射溶劑3ml/kg和AM2511mg/kg，并在電針結(jié)束后2h行MCAO。再灌注24h和7d后，

10、進(jìn)行神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分并測量大腦梗死容積百分比。
　　2.CB1受體參與重復(fù)電針預(yù)處理誘導(dǎo)的大鼠腦缺血耐受
　　健康雄性SD大鼠(280～320g)，隨機(jī)分為6組：Sham組、Con組、EA-MCAO組、AM-EA-MCAO組、v-EA-MCAO組和AM-MCAO組。除Sham組外其余各組動(dòng)物每天腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉，連續(xù)5d。Sham組僅行假手術(shù)；Con組僅缺血再灌注；EA-MCAO組接受電針刺激百會(huì)穴30mi

11、n/d，連續(xù)5d；AM-MCAO組每天腹腔注射AM2511mg/kg，連續(xù)5d；v-EA-MCAO組和AM-EA-MCAO組每天在電針預(yù)處理前30min分別給予溶劑3ml/kg(ip)和AM2511mg/kg(ip)，連續(xù)5d。除Sham組外其余各組均在最后一次預(yù)處理24h后行MCAO。再灌注24h后，進(jìn)行神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分并測量大腦梗死容積百分比。
　　3.重復(fù)電針預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注后內(nèi)源性大麻素的影響
　　健康雄性SD大鼠

12、(280～320g)，隨機(jī)分為5組：Sham組、Con-2組、EA-MCAO-2組、Con-24組和EA-MCAO-24組。Sham組、Con-2組和Con-24組每天腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg，連續(xù)5d，EA-MCAO-2組和EA-MCAO-24組每天在戊巴比妥鈉40mg/kg(ip)麻醉下電針刺激百會(huì)穴30min，連續(xù)5d。除Sham組外其余各組均在最后一次預(yù)處理24h后行MCAO。Sham組在最后一次處理24h后，Con-2

13、組和EA-MCAO-2組在再灌注2h后，Con-24組和EA-MCAO-24組在再灌注24h后深麻醉斷頭處死，檢測內(nèi)源性大麻素含量。
　　結(jié)果
　　1.CB1受體參與單次電針預(yù)處理誘導(dǎo)的大鼠腦缺血耐受
　　1.1神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分
　　EA-MCAO組大鼠再灌注24h和7d后神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分顯著高于Con組。單獨(dú)給予CB1受體拮抗劑AM251對(duì)于MCAO大鼠的神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分沒有影響，但在電針前30min給予AM251則

14、能夠逆轉(zhuǎn)電針預(yù)處理的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　1.2腦梗死容積百分比
　　EA-MCAO組大鼠再灌注24h和7d后腦梗死容積百分比顯著小于Con組。單獨(dú)給予CB1受體拮抗劑AM251對(duì)于MCAO大鼠的腦梗死容積百分比沒有影響，但在電針前30min給予AM251則能夠逆轉(zhuǎn)電針預(yù)處理的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　2.CB1受體參與重復(fù)電針預(yù)處理誘導(dǎo)的大鼠腦缺血耐受
　　2.1神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分
　　Sham組神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分正常，

15、EA-MCAO組神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分顯著高于Con組。單獨(dú)給予CB1受體拮抗劑AM251對(duì)于MCAO大鼠的神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分沒有影響，但在電針前30min給予AM251則能夠逆轉(zhuǎn)電針預(yù)處理的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　2.2腦梗死容積百分比
　　Sham組未見腦梗死灶。EA-MCAO組大鼠腦梗死容積百分比顯著小于Con組。單獨(dú)給予CB1受體拮抗劑AM251對(duì)于MCAO大鼠的腦梗死容積百分比沒有影響，但在電針前30min給予AM251則能夠逆轉(zhuǎn)

16、電針預(yù)處理的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　3.重復(fù)電針預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注后內(nèi)源性大麻素的影響
　　與Sham組相比Con-2組AEA含量顯著升高，而Con-24組則顯著下降。EA-MCAO-2組與Sham組及Con-2組相比AEA含量均顯著升高，EA-MCAO-24組與Con-24組相比AEA含量顯著升高。EA-MCAO-2組2-AG含量較Sham組和Con-2組均顯著提高。
　　小結(jié)
　　1、單次及重復(fù)電針刺激大鼠百會(huì)