基于RNA干擾技術(shù)的核酸藥物及藥物載體用于癌癥治療的研究.pdf

1、RNA干擾(RNAi)是近年來發(fā)現(xiàn)的在生物體內(nèi)普遍存在的一種生物學(xué)現(xiàn)象。在RNAi藥物開發(fā)中，一方面，需要不斷發(fā)現(xiàn)新的靶點(diǎn)(siRNA或miRNA)并揭示其功能和作用機(jī)制，從而指導(dǎo)臨床開發(fā)切實(shí)有效的RNA藥物，用于重大疾病診斷和治療，為患者帶來福音。另一方面，由于小核酸類藥物分子本身穿透細(xì)胞膜的能力極差，也不具備靶向功能，而且在生理環(huán)境中極不穩(wěn)定，因此小核酸類藥物研究的另一個(gè)重要關(guān)鍵是開發(fā)高效無毒的輸送體系。本課題針對(duì)以上兩方面開展了研

2、究，具體工作包括以下三個(gè)方面：
　　 1、研究了miRNA190在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用。通過qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)miR-190的表達(dá)量與乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，利用WB以及雙熒光素酶報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn)miR-190的下游靶點(diǎn)是TCF4以及ROCK1基因，可以通過與其3’-UTR結(jié)合從而抑制靶基因轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)。接著在細(xì)胞水平證實(shí)上調(diào)miR-190或下調(diào)TCF4或ROCK1可以抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。此外在乳腺癌轉(zhuǎn)移動(dòng)物

3、模型中，發(fā)現(xiàn)高表達(dá)miR-190可以大大減少肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生概率，并抑制乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移。
　　 2、成功制備了聚乙烯亞胺(PEI)包被的金納米顆粒用于siRNA輸送。PEI同時(shí)作為還原劑和穩(wěn)定劑，通過靜電作用以合適的質(zhì)量比結(jié)合siRNA，使得納米顆粒分散良好，有均一的大小和結(jié)構(gòu)。在結(jié)合siRNA后，用激光共聚焦和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PEI修飾的金納米顆?？梢詫iRNA帶入細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)沉默MDA-MB-435s細(xì)胞中綠色熒光蛋白的表達(dá)。

4、我們接著用PEI修飾的金納米顆粒攜載PLK1-siRNA作用于內(nèi)源性細(xì)胞周期激酶PLK1，顯著抑制了基因表達(dá)并誘導(dǎo)更多的細(xì)胞凋亡。細(xì)胞毒性MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PEI修飾的金納米顆粒沒有表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性。
　　 3、以異辛酸亞錫為催化劑，聚己內(nèi)酯作為大分子引發(fā)劑，通過開環(huán)聚合，成功制備了一系列兩親性羥基官能化聚磷酸酯與聚己內(nèi)酯的嵌段聚合物(PCL-b-PHEP)。利用核磁共振，凝膠滲透色譜、紅外色譜等對(duì)嵌段共聚物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。這