LMP-1高及低表達(dá)的CNE-2Z細(xì)胞系單克隆細(xì)胞株的建立及生物學(xué)特性.pdf

1、廣東醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文LMP1高及低表達(dá)的CNE2Z細(xì)胞系單克隆細(xì)胞株的建立及生物學(xué)特性姓名：李青申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：胡新榮20080501LMP1高表達(dá)及低表達(dá)的CNE2Z細(xì)胞系單克隆細(xì)胞株的建立及生物學(xué)特性摘要【目的】從CNE2Z細(xì)胞系中建立LMP1穩(wěn)定的高及低表達(dá)的鼻咽癌單克隆細(xì)胞株并研究其生物學(xué)特性，為后續(xù)采用RNAi方法阻斷LMP1表達(dá)來(lái)治療鼻咽癌的研究提供更為合適的細(xì)胞模型?！痉椒ā坎捎糜邢尴?/p>

2、釋法，從人低分化鼻咽癌細(xì)胞系CNE2Z中分離出若干個(gè)單克隆細(xì)胞株，通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)各單克隆細(xì)胞株LMP1的表達(dá)情況，從中篩選出LMP1高表達(dá)及低表達(dá)的單克隆細(xì)胞株，連續(xù)傳代至30代。用光學(xué)顯微鏡觀察兩細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)特征，結(jié)晶紫染色法和細(xì)胞有絲分裂指數(shù)法檢測(cè)兩者的增殖情況，流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期、增殖指數(shù)(PI)和凋亡率，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)克隆形成率，染色體分析法細(xì)胞株的核型特點(diǎn)?！窘Y(jié)果】(1)細(xì)胞分離后經(jīng)過(guò)5個(gè)月的培

3、養(yǎng)，成功獲得CNE2Z系的單克隆細(xì)胞株共12株，分別編號(hào)為L(zhǎng)1L12。(2)通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)染色法初步篩選出LMPl較高表達(dá)(8796％細(xì)胞陽(yáng)性)和較低表達(dá)(120％細(xì)胞陽(yáng)性)的兩株細(xì)胞為L(zhǎng)12和L9，并且兩株細(xì)胞的第15代、第22代和第30代的LMPl表達(dá)無(wú)明顯改變。(3)光鏡下兩株細(xì)胞均呈人低分化鼻咽癌上皮樣細(xì)胞形態(tài)，具有和母系CNE2Z細(xì)胞相似的形態(tài)特點(diǎn)，但L12比L9的生長(zhǎng)狀態(tài)更好。(4)結(jié)晶紫染色法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)結(jié)果：L12