海洋生物1號(hào)抑制鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE-2Z增殖的活性成份的分離純化和分析.pdf

1、【目的】從新鮮海洋生物1號(hào)中提取、分離和純化，得到抑制鼻咽癌細(xì)胞株增殖的活性成份。明確活性物質(zhì)所在的組份，并純化、鑒定活性物質(zhì)，為藥物后期的開發(fā)研究提供一定的根據(jù)。 【方法】 新鮮的海洋生物1號(hào)經(jīng)乙醇冷浸漬法提取，提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，恒溫干燥后得到乙醇粗提物。 1.系統(tǒng)溶劑法對(duì)乙醇粗提物進(jìn)行粗分，即用石油醚、乙酸乙酯和水飽和正丁醇作洗脫劑，依次經(jīng)過快速減壓干柱層析分離，得到相應(yīng)的組份。大孔吸附樹脂HP20層析法對(duì)

2、正丁醇組份進(jìn)一步分離。合并大孔吸附樹脂HP20分離的活性組份，從合并組份中萃取總生物堿，再用低壓硅膠柱層析法分離總生物堿。 2.MTT法測(cè)定各個(gè)層析組份對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE-2Z的生長(zhǎng)抑制作用，追蹤活性藥物所在的組份。 3.薄層層析法展開、分離和鑒定各組份內(nèi)物質(zhì)種類。 4.對(duì)分離得到的未知生物堿用液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，得出該物質(zhì)的分子量。 【結(jié)果】 1.乙醇粗提物經(jīng)過系統(tǒng)溶劑法分離得

3、3種組份 A、B和C，抑制細(xì)胞增殖的活性測(cè)定結(jié)果顯示，3種提取物對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE-2Z 均有不同程度的抑制作用，提取物B和提取物C都顯示出很強(qiáng)的活性，抑制效果呈時(shí)間一劑量依賴關(guān)系。三者抑制率兩兩比較，差異具有顯著性(P<0.01)。提取物A、B和C作用于CNE1細(xì)胞48小時(shí)的IC<,50>值分別為：743.45μg/ml、243.3μg/ml和311.55μg/ml；作用于CNE-2Z細(xì)胞48小時(shí)的IC<,50>值分別為：

4、952.88μg/ml、163.38μg/ml 和 238.42μg/ml。 2.提取物C經(jīng)大孔吸附樹脂HP20層析分離后，得到C1、C2、C3、C4和C5，藥物抑制細(xì)胞增殖結(jié)果顯示，C4和C5對(duì)兩者細(xì)胞系的生長(zhǎng)具有顯著抑制作用，并且呈時(shí)間一劑量依賴關(guān)系。C1、C2和C3對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用很弱。組份間兩兩比較，差異具有顯著性(P<0.01)。C4和C5作用于CNE1細(xì)胞48小時(shí)的IC<,50>值分別為：125.25μg/ml和

5、80.98μg/ml；作用于CNE-2Z細(xì)胞48小時(shí)的IC<,50>值分別為：125.85μg/ml和91.7μg/ml。 3.從C4、C5合并組份中提取的總生物堿經(jīng)過低壓硅膠柱層析得到D1、D2、D3和D4。檢測(cè)到D3和D4含大量生物堿，兩者作用于CNE1細(xì)胞48小時(shí)的IC<,50>值分別為：82.76μg/ml和1286.67μg/ml；作用于CNE-2Z細(xì)胞48小時(shí)的IC<,50>值分別為：105.34μg/ml和900.

6、97μg/ml。 4.液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析結(jié)果結(jié)合薄層層析鑒定結(jié)果證明 D3 生物堿分子量為234。 【結(jié)論】 1.對(duì)乙醇粗提物分離的3個(gè)組份，提取物B和C都顯示出較強(qiáng)的抑制鼻咽癌細(xì)胞株CNE1和CNE-2Z增殖的作用。 2.經(jīng)大孔吸附樹脂HP20分離的C4和C5組份對(duì)細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制活性。 3.總生物堿和分離到的D3都對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE1和CNE-2Z顯示出明顯的抑制作用。 4.