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文檔簡介
1、目的:研究ras蛋白激活物類似物-1(ras protein activator like-1,RASAL1)基因在正常胃黏膜上皮細(xì)胞株及胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況及其生物學(xué)意義。
方法:體外培養(yǎng)人正常胃黏膜上皮細(xì)胞株及三種不同分化程度的胃腺癌細(xì)胞株,分為正常對照組和高、中、低分化胃腺癌細(xì)胞組。采用RT-PCR方法和Western-blot法分別檢測高分化胃腺癌細(xì)胞株MKN-28、中分化胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901、低分化胃腺
2、癌細(xì)胞株BGC-823和正常胃黏膜上皮細(xì)胞株GES-1中RASAL1基因mRNA水平和蛋白水平的表達(dá),應(yīng)用基因測序法檢測上述三種胃腺癌細(xì)胞株中K-ras基因第一外顯子第12、13密碼子點(diǎn)突變情況,并分析其意義。結(jié)果:(1)RT-PCR結(jié)果顯示,與正常胃黏膜上皮細(xì)胞株相比,高、中、低分化胃腺癌細(xì)胞株中RASAL1 mRNA的表達(dá)量分別下調(diào)47.53％、85.80％、95.86％,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；且分化程度越低表達(dá)下調(diào)
3、越明顯,各分化程度胃腺癌細(xì)胞株之間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8098.175,P＜0.01)。(2)Western-blot結(jié)果表明,與正常胃黏膜上皮細(xì)胞相比,高、中、低分化胃腺癌細(xì)胞株中RASAL1蛋白的表達(dá)量分別下調(diào)40.12％、54.94％、63.33％,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；且分化程度越低表達(dá)下調(diào)越明顯,不同分化程度胃腺癌細(xì)胞株之間的差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3059.420,P＜0.01)。(3)經(jīng)PCR擴(kuò)增后基因測
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