熊果酸誘導(dǎo)鼻咽癌細胞株CNE-2Z凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：探討熊果酸誘導(dǎo)人鼻咽癌細胞CNE-2Z凋亡的作用機制。 方法：用不同濃度的熊果酸處理CNE-2Z細胞，采用：①四甲基偶氮唑藍比色法(MTT)檢測熊果酸對CNE-2Z細胞的增殖抑制效應(yīng)；②流式細胞術(shù)(FCM)分析細胞周期和凋亡率；③應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測凋亡相關(guān)基因bcl-2,bax和cox-2表達的變化；④Western blot檢測CNE-2Z細胞內(nèi)caspase 3的表達。 結(jié)果：1、MTT：熊果酸處理24

2、h，48h和72h時的IC50分別為30.56μmol/L，31.94μmol/L和33.06μmol/L。熊果酸呈濃度依賴性的抑制CNE-2Z細胞增殖，差異有顯著性(P＜0.05)。40-50μmol/L熊果酸分別作用24h、48h、72h后，CNE-2Z細胞幾乎停止增殖。2、FCM：經(jīng)熊果酸作用24h后，隨著藥物濃度的增加，細胞凋亡率逐漸升高，S期細胞的比例逐漸下降，G0/G1期細胞的比例逐漸增加，主要呈現(xiàn)G0/G1期阻滯，并存在濃

3、度依賴性。3、免疫組化SP法：bcl-2,bax和cox-2的表達可見于胞膜和胞漿，在24h時隨著藥物濃度的升高，bax的表達逐漸增強；bcl-2和cox-2與對照組比較表達則明顯降低。4、Western blot：用10～50μmol/L UA處理細胞24 h后，隨著UA濃度增加，活化的caspase3蛋白條帶逐漸加深。用Quantity One分析軟件測定條帶灰度值，求出每組caspase 3與β-actin條帶的灰度比值，實驗組與