小陷胸湯加味方干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化炎性機(jī)制的理論探討和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：應(yīng)用小陷胸湯加味方干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化炎性機(jī)制，探討動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠“痰瘀”的病理變化。通過觀察小陷胸湯加味方對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)大鼠模型血管內(nèi)皮的保護(hù)作用、主動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響、血脂和血液流變學(xué)及炎性因子的作用，初步闡明中醫(yī)痰熱瘀毒之邪與炎性因子及調(diào)控機(jī)制之間的的相關(guān)性，證明小陷胸湯加味方對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化炎性機(jī)制的干預(yù)作用。 方法： 理論探討：在廣泛收集整理歷代醫(yī)家有關(guān)論述與現(xiàn)

2、代關(guān)于AS文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，依據(jù)清熱祛痰化瘀通絡(luò)法探討AS中醫(yī)病機(jī)，指出痰脂阻絡(luò)是AS的發(fā)病基礎(chǔ)，痰瘀熱毒互結(jié)、脈道不暢是AS的主要病理環(huán)節(jié)，痰瘀化熱是AS的主要病理改變。確立“清熱祛痰、化瘀通絡(luò)”的治法，并據(jù)此制定小陷胸湯加味方劑。 實(shí)驗(yàn)研究： 健康雄性SD大鼠采用高脂飲食并一次性腹腔注射維生素D3的方法建立AS大鼠模型。將雄性SD大鼠隨即分為空白對(duì)照組，模型組，辛伐他汀組，小陷胸湯加味方劑量組?？瞻讓?duì)照組給予普通飼料，其

3、它各組均給予高脂飼料喂養(yǎng)。辛伐他汀組和小陷胸湯加味方組在高脂飲食基礎(chǔ)上分別灌胃給予辛伐他汀和小陷胸湯加味方，空白對(duì)照組和模型組給予等體積溶媒，各組連續(xù)灌胃給藥8周。于8周末檢測(cè)大鼠血清中總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三脂(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density li

4、poprotein-cholesterol，HDL-C)含量；血液流變學(xué)各項(xiàng)含量；應(yīng)用光鏡觀察主動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的變化；透射電鏡觀察主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變；免疫比濁法測(cè)量高敏C反應(yīng)蛋白(high-sensitive C reactiveprotein，hs-CRP)、免疫組織化學(xué)染色觀察細(xì)胞間黏附分子-1(inter-cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管細(xì)胞黏附分子-1(vascular cell

5、adhesion molecule-1,VCAM-1)指標(biāo)的改變；并采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)8周末主動(dòng)脈勻漿中ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1小陷胸湯加味方對(duì)AS大鼠的血脂、血流變及主動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響與空白對(duì)照組相比較，模型組TC、TG、LDL-C均明顯升高(P<0.05)，HDL-C明顯降低(P<0.05)；與模型組相比較，小陷胸湯加味方劑量組的總膽固醇(TC)，甘油三

6、脂(TG)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，顯著降低(P<0.01)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)無顯著變化(P>0.05)。與模型組相比較，辛伐他汀組的總膽固醇(TC)，甘油三脂(TG)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，均有不同程度地降低(P<0.01)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)無顯著變化(P>0.05)。小陷胸湯加味方和辛伐他汀組相比較無顯著差異(P>0.05)。 與空白對(duì)照組相比較，模型組的血液流變學(xué)各項(xiàng)均

7、明顯升高(P<0.01)；與模型組相比較，辛伐他汀組血液流變學(xué)各項(xiàng)無顯著差異(P>0.05)；與模型組相比較，小陷胸湯加味方組血液流變學(xué)各項(xiàng)水平顯著降低(P<0.01)。 HE染色結(jié)果顯示： 模型組：8周末主動(dòng)脈內(nèi)膜可見成熟的斑塊，斑塊主要由泡沫細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、膠原纖維及炎性細(xì)胞等構(gòu)成，斑塊內(nèi)纖維組織明顯增生，少數(shù)已經(jīng)在其表面形成纖維層。 辛伐他汀組：8周末主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，單位面積下內(nèi)皮細(xì)胞增多，內(nèi)

8、皮下泡沫細(xì)胞增生，斑塊較模型組減小，炎性細(xì)胞浸潤減少，病變較模型組減輕。 小陷胸湯加味方組：8周末主動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊較模型組明顯減小，甚至消失，泡沫細(xì)胞數(shù)量顯著減少，偶見炎性細(xì)胞浸潤，內(nèi)皮增生、略腫脹，病變較模型組明顯減輕。 電鏡結(jié)果顯示： 模型組：8周末主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞明顯腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴(yán)重脫顆粒，線粒體數(shù)量減少，嵴減少、融合、甚至消失，吞飲小泡數(shù)量明顯減少。 辛伐他汀組：8周末主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度

9、擴(kuò)張、不整形，有脫顆?，F(xiàn)象，線粒體嵴減少，吞飲小泡數(shù)量減少。與模型組相比較，病變減輕。 小陷胸湯加味方組：8周末主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張呈池狀，有輕微脫顆粒現(xiàn)象，線粒體嵴較多、部分融合消失。與模型組相比較，病變明顯減輕。 2小陷胸湯加味方對(duì)AS大鼠心臟主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞炎性因子ICAM-1、VCAM-1、hs-CRP表達(dá)的影響：與空白對(duì)照組相比較，模型組主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞hs-CRP陽性表達(dá)強(qiáng)度顯著增加，ICAM-1和VCA

10、M-1陽性表達(dá)的強(qiáng)度和范圍亦增強(qiáng)(P<0.01)；辛伐他汀組、小陷胸湯加味方組與同時(shí)間模型組比較，hs-CRP、ICAM-1、VCAM-1陽性表達(dá)顯著減少(P<0.05，P<0.01)；小陷胸湯加味方組ICAM-1、VCAM-1、hs-CRP的陽性表達(dá)較辛伐他汀組減少(P<0.01)。 3小陷胸湯加味方對(duì)AS大鼠心臟主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA表達(dá)的影響：與空白對(duì)照組比較，模型組ICAM-1、VCAM-1 mRNA

11、轉(zhuǎn)錄水平顯著升高(P<0.01)；與模型組相比較，辛伐他汀組、小陷胸湯加味方組ICAM-1及VCAM-1 mRNA顯著降低(P<0.05，P<0.01)；小陷胸湯加味方組ICAM-1及VCAM-1 mRNA水平顯著低于辛伐他汀組(P<0.01)。 結(jié)論： 1本課題根據(jù)動(dòng)脈粥樣硬化是炎性病變探討中醫(yī)的病機(jī)和治療，指出痰脂阻絡(luò)是動(dòng)脈粥樣硬化的中醫(yī)的病理基礎(chǔ)，通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是由于痰凝日久，終致脈道不利，氣機(jī)不

12、暢，血脈瘀阻而成脈痹。其痰瘀熱毒的病理基礎(chǔ)與動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的炎性機(jī)制及調(diào)控機(jī)制具有內(nèi)在相關(guān)性。確立“清熱祛痰、化瘀通絡(luò)”的治法并據(jù)此制定小陷胸湯加味方劑，具有理論創(chuàng)新性。 2研究表明，小陷胸湯加味方能改善主動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)和內(nèi)皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)的病理改變，對(duì)血管內(nèi)皮具有保護(hù)作用；還能降低高脂損傷大鼠的總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，降低血液流變學(xué)各指標(biāo)的作用，具有降脂，改善血液黏度的作用；

13、同時(shí)小陷胸湯加味方還能夠降低血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而減少血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)蛋白的表達(dá)，還能抑制炎性因子高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)的表達(dá)，發(fā)揮其抗炎的作用。綜上實(shí)驗(yàn)，我們初步證明了降脂，抗血小板聚集，抗炎，抑制炎性因子基因及蛋白的表達(dá)是小陷胸湯加味方干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制，說明小陷胸湯加味方在抑制血管內(nèi)皮炎