2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、我國大部分綿羊?yàn)榧竟?jié)性發(fā)情品種,綿羊的季節(jié)性發(fā)情制約了養(yǎng)羊業(yè)生產(chǎn)效率。綿羊常年發(fā)情可以提高生產(chǎn)效率,促進(jìn)養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展,因此了解常年發(fā)情的分子機(jī)制,對改變綿羊季節(jié)性發(fā)情性狀及新品種培育具有重要作用。本課題組前期通過RNA-Seq篩選發(fā)現(xiàn)BAD基因是常年發(fā)情及季節(jié)性發(fā)情綿羊卵巢組織中的差異表達(dá)基因。為了驗(yàn)證RNA-Seq結(jié)果,并探索BAD基因在綿羊發(fā)情啟動中的作用機(jī)制,本研究對BAD基因進(jìn)行了功能鑒定。本研究以小尾寒羊卵巢上成熟卵泡為試驗(yàn)材料

2、,用抽吸法分離卵泡顆粒細(xì)胞,構(gòu)建適合綿羊卵泡顆粒細(xì)胞生長的培養(yǎng)體系,并用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測卵泡顆粒細(xì)胞上特異性表達(dá)的促卵泡刺激素受體(Follicle-stimulating hormone receptor,F(xiàn)SHR)蛋白,鑒定顆粒細(xì)胞純度;設(shè)計(jì)合成有效的BAD-siRNA,轉(zhuǎn)染原代綿羊卵泡顆粒細(xì)胞,以沉默BAD基因,用熒光定量PCR技術(shù)、Western-blot和細(xì)胞免疫熒光方法檢測BAD基因在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)變化,用

3、放射免疫方法檢測顆粒細(xì)胞分泌孕酮和雌二醇的濃度變化。獲得以下結(jié)果:熒光定量PCR檢測表明BAD基因在綿羊不同情期卵巢中的表達(dá)與前期測序結(jié)果一致,在發(fā)情前期的表達(dá)量顯著高于(P<0.05)發(fā)情期、發(fā)情間期和休情期。我們所獲得的原代綿羊卵泡顆粒細(xì)胞中FSHR陽性率高達(dá)98%,說明卵泡顆粒細(xì)胞純度較高。BAD-siRNA轉(zhuǎn)染顆粒細(xì)胞48小時后,熒光定量PCR檢測結(jié)果表明BAD基因在mRNA水平表達(dá)下降68.82%,Western-blot和細(xì)

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