綿羊毛性狀相關(guān)基因的鑒定及初步研究.pdf

1、中國(guó)美利奴羊無(wú)論在產(chǎn)毛量或羊毛品質(zhì)上都是我國(guó)優(yōu)秀的遺傳資源，但它與澳洲美利奴羊等世界著名綿羊品種之間還存在著一定差距，如何縮小這種差距甚至超越它們成為我國(guó)綿羊遺傳育種工作者的一項(xiàng)重要任務(wù)，而目前常規(guī)的育種方法已不能取得明顯的改良效果，越來(lái)越多的育種工作者們?cè)噲D通過(guò)尋找與綿羊毛性狀相關(guān)的基因并運(yùn)用分子水平的操作提高羊毛的產(chǎn)量和改善羊毛的品質(zhì)。 本研究首先以中國(guó)美利奴羊成年母羊?yàn)檠芯繉?duì)象，利用mRNA差異顯示技術(shù)對(duì)羊毛性狀存在顯著差

2、異的綿羊不同部位(肩、腹、腿)皮膚中總RNA進(jìn)行分析，尋找皮膚中差異表達(dá)的基因，經(jīng)過(guò)篩選，本研究共獲得差異表達(dá)的基因片段4個(gè)，其中，差異表達(dá)基因SeqⅠ，seqⅡ，seqⅢ為綿羊肩、腹部特異表達(dá)的基因，3個(gè)基因片段的大小分別為190bp，222bp，175bp，差異表達(dá)基因Ⅳ為腿部特異表達(dá)的基因，片段大小為255bp。對(duì)4個(gè)特異基因片段進(jìn)行克隆、測(cè)序，并進(jìn)行初步的生物信息學(xué)分析，在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中利用blastn進(jìn)行檢索，未發(fā)現(xiàn)與4個(gè)基

3、因片段高度同源的序列。通過(guò)NorthernBlot鑒定后，利用組織原位雜交技術(shù)對(duì)4個(gè)片段在綿羊毛囊的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè).檢測(cè)結(jié)果顯示在綿羊毛囊中存在4個(gè)基因的mRNA，表明4個(gè)DNA在綿羊毛囊中轉(zhuǎn)錄形成相應(yīng)的mRNA，4個(gè)基因的全序列和具體功能還需進(jìn)行深入研究。 同時(shí)，本研究還利用組織原位雜交技術(shù)對(duì)生長(zhǎng)激素受體(GHR)基因在綿羊毛囊的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，GHR為生長(zhǎng)激素(GH)的受體，GH作用有兩種方式：一是先作用于肝臟等器官的G

4、HR，產(chǎn)生胰島素樣生長(zhǎng)因子(Insulin-likegrowthfactors，IGFs)，IGFs以內(nèi)分泌方式進(jìn)入血液，與結(jié)合蛋白(IGFBPs)結(jié)合后到達(dá)細(xì)胞，作用于細(xì)胞膜表面的IGF受體(IGFR)，調(diào)節(jié)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育；二是GH直接作用于靶器官的GHR，通過(guò)旁分泌或自分泌IGFs直接影響細(xì)胞的代謝而調(diào)節(jié)器官的生長(zhǎng)發(fā)育。本研究的檢測(cè)結(jié)果表明在綿羊毛囊存在GHR基因的表達(dá)，因此GH對(duì)羊毛生長(zhǎng)的影響是通過(guò)與綿羊毛囊中細(xì)胞表面的GHR結(jié)合，