抑制素βA亞基基因?qū)d羊繁殖性狀的功能驗(yàn)證.pdf

1、抑制素βA亞基基因與綿羊的產(chǎn)羔數(shù)有一定關(guān)聯(lián),該基因在體內(nèi)的生理作用主要是通過自分泌和旁分泌的形式選擇性的抑制促卵泡素的合成和分泌,影響卵泡的生長發(fā)育和卵巢機(jī)能對(duì)動(dòng)物發(fā)情和繁殖性狀的調(diào)控。所以本研究以抑制素βA亞基作為候選基因探討它與部分繁殖性狀以及發(fā)情相關(guān)激素的關(guān)聯(lián)。針對(duì)抑制素βA基因的作用,我們?cè)O(shè)計(jì)了以下幾個(gè)實(shí)驗(yàn):
　　(1)采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)技術(shù)(PCR-SSCP)檢測(cè)該基因多態(tài)性分析其與產(chǎn)羔數(shù)的關(guān)聯(lián)。結(jié)果表明,

2、哈薩克羊、薩?？搜蚝偷轮忻览蛲怙@子1的5’調(diào)控區(qū)引物0-2存在多態(tài)性位點(diǎn),有三種基因型。測(cè)序發(fā)現(xiàn),基因型AA在5’調(diào)控區(qū)存在四個(gè)較為密集的堿基突變位點(diǎn)。顯著性分析顯示,哈薩克羊基因型AA比基因型AB和BB產(chǎn)羔數(shù)分別多0.20個(gè)(P<0.05)和0.26個(gè)(P<0.05),德中雜交基因型AA比基因型AB和BB產(chǎn)羔數(shù)多0.25個(gè)(P<0.05)和0.34個(gè)(P<0.05)。結(jié)果表明:抑制素βA基因與哈薩克羊和德中雜交羊的產(chǎn)羔數(shù)存在一定關(guān)

3、聯(lián)。
　　(2)抑制素βA基因干擾載體構(gòu)建:首先根據(jù)GenBank上綿羊抑制素mRNA的序列設(shè)計(jì)干擾片段,通過酶切的方法和測(cè)序驗(yàn)證成功的構(gòu)建了4個(gè)抑制素RNAi質(zhì)粒載體和1個(gè)空載體陰性對(duì)照。
　　(3)在成功分離卵巢顆粒細(xì)胞并建立培養(yǎng)體系后,利用Lip2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞,通過熒光定量檢測(cè)干擾前后抑制素βA基因表達(dá)量的變化。結(jié)果顯示:四個(gè)干擾載體的干擾效率依次為34％、58%、39%和19%,其中干擾載體2對(duì)抑制素βA的沉默

4、效果最好
　　(4)通過卵巢注射干擾載體2(RNAi-2)的方法,檢測(cè)干擾后綿羊的發(fā)情狀況,以及血清中INHBA、FSH、LH和E2的含量。結(jié)果顯示:在注射干擾載體后,處理組中一只綿羊有發(fā)情現(xiàn)象,血清中INHBA和FSH水平分別呈現(xiàn)明顯的下降和上升波峰,LH和E2水平?jīng)]有發(fā)生明顯變化。結(jié)果表明:INHBA基因?qū)d羊的發(fā)情性狀具有一定的作用。
　　這一結(jié)果,為綿羊繁殖性狀和發(fā)情性狀的研究奠定了良好的理論基礎(chǔ),同時(shí)也為RNAi應(yīng)