豬附紅細胞體小鼠感染模型的建立及血液學指標的檢測.pdf

1、本研究對豬附紅細胞體(EH)的不同實驗室檢測方法、小鼠模型建立以及附紅細胞體感染小鼠后的血液學免疫學變化進行了較深入的探討。 一、豬附紅細胞體實驗室檢測方法的建立 本研究采用了光學顯微鏡鏡檢(包括鮮血滴片鏡檢和瑞氏-姬姆薩染色鏡檢)、透射電鏡觀察以及PCR檢測方法檢測豬EH。鮮血滴片鏡檢和瑞氏-姬姆薩染色涂片均能清晰地觀察到EH的形態(tài)結構，但此兩種方法易產生假陽性，需要透射電鏡檢測或者是PCR檢測作為輔助診斷。通過透射電

2、鏡可以觀察到EH的超微結構，發(fā)現(xiàn)EH附著于紅細胞表面從而引起紅細胞內陷，其結果可以作為診斷依據(jù)，但此法操作復雜，成本較高，不宜作為臨床普及使用。 本研究根據(jù)已有的豬EH特異性片段設計引物，成功地擴增得到810 bp的PCR產物。本實驗所建立的豬EH的PCR檢測方法具有高度的特異性和敏感性，可以用于豬附紅細胞體病的流行病學調查。同時，本研究初步建立了豬EH的SYBR Green熒光定量PCR檢測方法。根據(jù)已有的豬EH特異性片段設計

3、引物，通過條件的優(yōu)化，建立的方法簡便快速，特異性高。 二、豬附紅細胞體小鼠感染模型的建立 本研究分別采用感染豬附紅細胞體病的豬全血和分離純化的豬EH作為感染源攻毒SPF昆明小鼠，感染后通過血液壓滴片鏡檢，PCR檢測及透射電鏡檢測鑒定模型建立成功。結果顯示采用分離純化的豬EH作為感染源的攻毒小鼠在感染后3 d左右感染率（感染附紅細胞體的紅細胞所占紅細胞總數(shù)的比率）達到了高峰，而后又下降。而采用感染豬EH的豬全血作為感染源的

4、攻毒小鼠一直維持一種低的感染狀態(tài)。表明采用分離純化的豬EH作為感染源可以取得更為良好的效果，此模型可用于附紅細胞體病致病機制和藥物篩選等方面的研究。 三、人工感染豬附紅細胞體對小鼠血液學及免疫學指標的影響 在構建豬EH小鼠感染模型的基礎上，研究了感染后血液常規(guī)指標，RBC-IC花環(huán)率和脾淋巴細胞轉化功能的變化，旨在為附紅細胞體病跨種間感染機制研究以及免疫功能變化研究提供借鑒。研究結果顯示小鼠感染EH后紅細胞總數(shù)減少，血紅

5、蛋白含量降低，紅細胞比容降低，RBC-IC花環(huán)率上升，其他指標沒有顯著變化。提示EH感染可能并不能引起機體強烈的細胞免疫應答，但是可能對非特異的紅細胞免疫系統(tǒng)有影響。具體機制有待進一步研究。 通過本研究，建立了豬EH光鏡、透射電鏡及PCR檢測方法，并建立了EH的SPF小鼠感染模型，研究了EH感染對血液常規(guī)指標，紅細胞免疫粘附功能以及淋巴細胞轉化功能的影響，初步探索了附紅細胞體病免疫致病機理，為防止附紅細胞體病的爆發(fā)流行提供了前期