胃癌中hMSH2與PTEN表達(dá)相關(guān)性研究.pdf

1、目的：胃癌是常見惡性腫瘤之一。在我國胃癌居各種惡性腫瘤的首位，胃癌年均死亡率為25.53/10萬人口，而且有逐漸增加的趨勢。大量實(shí)驗證實(shí)癌基因和抑癌基因編碼的蛋白大多參與細(xì)胞內(nèi)傳導(dǎo)通路。癌基因的激活和抑癌基因的失活造成腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。對于胃癌有關(guān)癌基因、抑癌基因的改變進(jìn)行研究，有助于加深理解胃癌生物學(xué)本質(zhì)及探討胃癌發(fā)生，發(fā)展機(jī)制及指導(dǎo)臨床治療提供理論依據(jù)。 錯配修復(fù)基因(mismatch repair，MMR)是生物進(jìn)化過程中

2、的保守基因，具有修復(fù)DNA堿基錯配，增強(qiáng)DNA復(fù)制忠實(shí)性，維持基因組穩(wěn)定性，降低自發(fā)性突變的功能。hMSH2是第一個被分離的人類MMR基因，于1993年由Fishel等克隆。研究表明hMSH2與胃癌的發(fā)生關(guān)系密切。PTEN(phosphataseand tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)為1997年發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，位于10q23.3，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為515kb mRNA，是第一個被發(fā)

3、現(xiàn)的具有磷酸酶活性的抑癌基因。目前研究表明PTEN的腫瘤抑制作用，主要是依賴其磷酸酶的活性而實(shí)現(xiàn)的。Yang等研究表明：PTEN在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。有研究顯示hMSH2減少增加了癌基因和(或)抑癌基因的突變率，從而引起腫瘤發(fā)生。hMSH2是否通過增加PTEN的突變而引起腫瘤，hMSH2和PTEN之間有無相關(guān)性，有待于進(jìn)一步研究。 本實(shí)驗檢測胃癌組織中hMSH2與PTEN的蛋白表達(dá)情況，結(jié)合對照近端癌旁組織(距癌組織3

4、cm)、遠(yuǎn)端癌旁組織(距癌組織>10cm)及正常胃組織(為外傷、息肉、潰瘍病需手術(shù)切除的非胃癌組織以后稱正常組織)中二者的表達(dá)情況，探討hMSH2與PTEN在胃癌組織中的蛋白表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系，指導(dǎo)及尋求胃癌臨床診斷、評估其惡性程度及轉(zhuǎn)移潛能、預(yù)測其預(yù)后可能的有效方法。方法： 1.采用SP免疫組化兩步法對42例胃癌組織及其相應(yīng)的近端癌旁組織、遠(yuǎn)端癌旁組織及15例正常胃組織，進(jìn)行hMSH2與PTEN蛋白表達(dá)的檢測；采用W

5、estern Blot半定量檢測42例胃癌組織及相應(yīng)遠(yuǎn)端癌旁組織hMSH2與PTEN蛋白表達(dá)。 2.采用SAS6.12統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用x2檢驗，P<0.05為差異有顯著性意義。應(yīng)用非參數(shù)統(tǒng)計中Spearman等級相關(guān)對二者在胃癌組織中的表達(dá)相互間關(guān)系進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1.用免疫組織化學(xué)法檢測hMSH2與PTEN蛋白表達(dá)特征： 1.1hMSH2和PTEN蛋白在胃癌組織及近端癌旁組織、

6、遠(yuǎn)端癌旁組織和正常胃組織中的表達(dá)： 胃癌組織中hMSH2、PTEN蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞漿及細(xì)胞核。hMSH2蛋白表達(dá)缺失率在胃癌組織為54.76％(23/42)，在近端癌旁組織為19.05％(8/42)，在遠(yuǎn)端癌旁組織為14.29％(6/42)，在正常胃組織為0.00％(0/15)。胃癌組織中hMSH2蛋白表達(dá)缺失率明顯高于近端癌旁組織、遠(yuǎn)端癌旁組織及正常胃組織(P<0.05)；而近端癌旁組織、遠(yuǎn)端癌旁組織及正常胃組織之間hMSH

7、2蛋白表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。 PTEN蛋白表達(dá)缺失率在胃癌組織為61.90％(26/42)，在近端癌旁組織為23.81％(10/42)，在遠(yuǎn)端癌旁組織為16.67％(7/42)，在正常胃組織為20.00％(3/15)。胃癌組織中PTEN蛋白表達(dá)缺失率明顯高于近端癌旁組織、遠(yuǎn)端癌旁組織及正常胃組(P<0.05)；而近端癌旁組織、遠(yuǎn)端癌旁組織及正常胃組織之間PTEN蛋白表達(dá)缺失率無顯著差異（P>0.05)； 1.2胃癌組織

8、中hMSH2和PTEN蛋白表達(dá)特征與臨床病理類型關(guān)系hMSH2表達(dá)缺失率與患者的年齡、性別、腫瘤發(fā)生的部位、腫瘤分化程度、漿膜侵犯、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯關(guān)系(P>0.05)。 PTEN蛋白表達(dá)缺失率與患者年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位未見明顯相關(guān)(P>0.05)、與腫瘤分化程度負(fù)相關(guān)(rs=-0.707317P<0.05)，與TNM分期、侵潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(rs=0.748157、rs=0.97958、rs=0.8

9、50255、rs=0.877482P<0.05)分化程度越高，PTEN表達(dá)缺失率越低，侵犯漿膜、TNM分期的Ⅲ+IV期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，PTEN表達(dá)缺失率越高。 2.Western Blot檢測結(jié)果β-actin、hMSH2、PTEN蛋白分子量為42KD、110KD、55kD，Western雜交后分別在42KD、110KD、55kD位置出現(xiàn)相應(yīng)陽性條帶。采用凝膠成像分析系統(tǒng)對雜交條帶進(jìn)行半定量分析，蛋白含量以積分光密度值(IOD)

10、表示。每次檢測蛋白時均檢測β-actin蛋白，以其為標(biāo)準(zhǔn)對所檢測hMSH2、PTEN蛋白進(jìn)行定量。與遠(yuǎn)端對照組織相比，42例胃癌組織中hMSH2蛋白有21例出現(xiàn)低表達(dá)，其低表達(dá)率為50.00％，PTEN有17例出現(xiàn)低表達(dá)，其低表達(dá)率為40.48％。 3.hMSH2與PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性hMSH2與PTEN蛋白表達(dá)在胃癌中呈正相關(guān)(免疫組化檢測中rs=0.938012，蛋白印記檢測中rs=0.870675P<0.05)。在胃癌組織中錯

11、配修復(fù)基因hMSH2蛋白表達(dá)缺失常伴有PTEN白表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論： (1)免疫組化和western blot檢測結(jié)果一致，hMSH2與PTEN在胃癌的組織中表達(dá)缺失率升高，二者在胃癌組織中表達(dá)缺失率均高于近端癌旁組織、遠(yuǎn)端癌旁組織及正常胃組織。(2)在胃癌組織中hMSH2表達(dá)與其臨床病理特征未見相關(guān)；(3)PTEN表達(dá)與其臨床病理特征相關(guān)：腫瘤分化程度高的胃癌組織中PTEN蛋白表達(dá)缺失率低；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)