高脂血癥對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠腎草酸鈣結(jié)晶模型的影響.pdf

1、研究背景：
　　 腎結(jié)石是一種嚴(yán)重影響人體健康的臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病，雖然腎結(jié)石的診斷及治療技術(shù)在過(guò)去的幾十年中取得了巨大的進(jìn)步，但其發(fā)病率和復(fù)發(fā)率仍高居不下，究其原因主要是由于目前對(duì)腎結(jié)石的發(fā)病機(jī)制還不明確，相關(guān)研究進(jìn)展也較為緩慢。便捷、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物草酸鈣結(jié)石模型是研究腎結(jié)石臨床和基礎(chǔ)研究的重要手段和工具，對(duì)探索腎結(jié)石產(chǎn)生和防治機(jī)制具有重要意義。
　　 近年來(lái)大宗的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，肥胖、胰島素抵抗、2型糖尿病、尿pH

2、值降低、高血壓等代謝因素不單是腎結(jié)石發(fā)生的危險(xiǎn)因素，而且還與結(jié)石的演進(jìn)密切相關(guān)。目前代謝綜合征中單個(gè)因素具體如何參與結(jié)石形成過(guò)程的研究相對(duì)薄弱。血脂異常作為代謝綜合征的關(guān)鍵組成，其對(duì)結(jié)石生成的影響尚未見(jiàn)相關(guān)基礎(chǔ)研究報(bào)道。
　　 從腎結(jié)石成分來(lái)看，人類腎結(jié)石主要以含鈣結(jié)石為主，其中又以草酸鈣結(jié)石最多，約占結(jié)石總數(shù)的80％。主流觀點(diǎn)認(rèn)為尿液中草酸鈣晶體的成核、生長(zhǎng)、聚集是草酸鈣結(jié)石形成的主要機(jī)制。尿液中結(jié)石成分過(guò)飽和析出只是結(jié)石生成

3、條件之一，在正常生理狀態(tài)下，腎小管中的草酸鈣晶體由于尿液的沖刷作用而隨尿液排出，無(wú)法在腎小管中聚集形成結(jié)石，只有在腎小管上皮損傷情況下，尿中的草酸鈣晶體才能夠黏附、生長(zhǎng)和聚集于。腎內(nèi)或腎乳頭表面形成結(jié)石斑，并經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)最終生成草酸鈣結(jié)石。因而，草酸鈣結(jié)晶的沉積被認(rèn)為是草酸鈣結(jié)石生成的重要基礎(chǔ)，建立一種成熟、穩(wěn)定的草酸鈣結(jié)晶模型對(duì)研究草酸鈣結(jié)石早期生成機(jī)制具有重要作用。
　　 研究目的：
　　 通過(guò)腹腔注射乙醛酸鹽來(lái)增

4、加尿草酸排泄量，同時(shí)輔以腎小管損傷因素，摸索出一種造模時(shí)間短、結(jié)晶生成效果好的小鼠腎草酸鈣結(jié)晶模型建模方法，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法來(lái)驗(yàn)證載脂蛋白E(ApolipoproteinE，ApoE)基因缺陷小鼠和低密度脂蛋白受體(LowDensityLipoproteinReceptor，LDLR)缺陷小鼠誘導(dǎo)的高脂血癥是否促進(jìn)乙醛酸鹽誘導(dǎo)的。腎臟草酸鈣結(jié)晶的生成并探討其可能作用機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 第一部分通過(guò)給予C5

5、7BL/6、BABL-c、129S三種品系小鼠腹腔注射乙二醇體內(nèi)代謝中間產(chǎn)物乙醛酸鹽來(lái)增加尿草酸排泄量，同時(shí)輔以腎小管上皮細(xì)胞毒劑氯化銨自由飲水的方法建立小鼠腎草酸鈣結(jié)晶模型。苦味酸－天狼星紅染色觀察腎組織纖維化情況。HE染色觀察小鼠腎組織草酸鈣結(jié)晶生成情況，并對(duì)各組小鼠腎組織中鈣元素的含量進(jìn)行定量檢測(cè)。第二和第三部分分別采用ApoE基因缺陷小鼠和LDLR缺陷小鼠誘導(dǎo)建立高脂血癥小鼠模型。并對(duì)兩種不同的方案誘導(dǎo)高脂血癥小鼠模型給予腎草酸

6、鈣結(jié)晶誘導(dǎo)方案，通過(guò)HE染色觀察小鼠腎組織中草酸鈣結(jié)晶生成情況，并測(cè)定腎組織以及血清中鈣和維生素E含量，同時(shí)采用相關(guān)性分析方法評(píng)估小鼠腎組織中鈣含量與血脂水平的關(guān)系，同時(shí)監(jiān)測(cè)腎組織中骨橋蛋白(osteopontin，OPN)表達(dá)情況。檢測(cè)腎組織中脂質(zhì)過(guò)氧化丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)水平。
　　 研究結(jié)果：
　　 三種品系小鼠采用腹腔注射乙醛酸，同時(shí)輔以1％

7、氯化銨自由飲水的結(jié)晶誘導(dǎo)方案，在給藥7天后成功建立腎草酸鈣結(jié)晶模型，苦味酸天狼星紅染色結(jié)果提示腎組織存在纖維化表現(xiàn)。分別由ApoE基因缺陷和LDLR缺陷誘導(dǎo)的小鼠高脂血癥加重乙醛酸鹽誘導(dǎo)的腎臟草酸鈣結(jié)晶的生成。免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于對(duì)照組，高脂血癥組小鼠腎小管以及腎間質(zhì)中OPN表達(dá)明顯增加。另外在腎組織和血液中鈣和維生素E含量檢測(cè)中出現(xiàn)高脂血癥小鼠模型腎組織中維生素E含量低，而血中含量高的維生素E器官吸收障礙表現(xiàn)。另外高脂血癥組小鼠腎

8、組織中GSH水平低于對(duì)照的野生型小鼠，MDA水平高于對(duì)照。
　　 研究結(jié)論：
　　 1.通過(guò)腹腔注射乙醛酸，并輔以氯化銨飲水的方法7天即可建立的實(shí)驗(yàn)性小鼠腎草酸鈣結(jié)晶模型，該模型兼具急性腎損傷和慢性纖維化的特征，是一種造模時(shí)間短、成石效果好的小鼠結(jié)晶模型造模方案。2.ApoE基因缺陷和LDLR缺陷導(dǎo)致的小鼠高脂血癥可以加重乙醛酸鹽誘導(dǎo)的腎臟草酸鈣結(jié)晶的生成；氧化/抗氧化平衡紊亂、全身性系統(tǒng)性促鈣化因素可能是高脂血癥促進(jìn)小