小麥和二穗短柄草成熟胚愈傷組織遺傳轉化體系的建立.pdf

1、小麥（Triticum aestivumL.）是世界上生產(chǎn)面積最大的糧食作物，因其基因組龐大和組織培養(yǎng)再生率低，也是最難實現(xiàn)遺傳轉化的作物，因此建立小麥的遺傳轉化體系具有十分重要的意義。二穗短柄草（Brachypodium distachyon），擁有模式植物的物理特性和生物學特性，與禾本科作物水稻、玉米和小麥等親緣關系近，同小麥族植物一樣具有二倍和其它多倍，可作為禾本科植物理想的模式植物。本文采用農(nóng)桿菌介導和基因槍轟擊的方法建立小麥和

2、二穗短柄草遺傳轉化體系。
　　主要結果如下:
　　1.小麥成熟胚組培體系的建立
　　以揚麥158和鄭麥9023的成熟胚為材料，通過成熟胚體離體培養(yǎng)，對比不同激素及濃度對愈傷組織誘導和再生力的影響。結果表明:不同激素及濃度對愈傷誘導率沒有顯著影響，對再生率影響顯著，成熟胚離體培養(yǎng)適宜的激素配比為誘導時采用4 mg/L Dicamba，分化時用5 mg/L KT;與鄭麥9023相比較，揚麥158的再生率明顯較高。
　

3、　2.小麥遺傳轉化的初步研究
　　利用2種不同的轉化方法對揚麥158成熟胚愈傷組織進行轉化。在農(nóng)桿菌介導轉化時設置了6組不同的侵染強度，在菌液濃度OD600為0.8，侵染30min的強度組合下獲得了6株抗性再生植株，而其它的侵染條件下沒有得到抗性植株;在基因槍轟擊中設置了4組不同的轟擊參數(shù)，轟擊后的愈傷組織經(jīng)過抗性篩選，并未獲得再生株系。
　　3.二穗短柄草組培體系的建立
　　以二穗短柄草Bd21成熟胚為材料，探索了次

4、氯酸鈉消毒時間和CuSO4對胚離體培養(yǎng)的影響。結果表明，種子用次氯酸鈉消毒15min愈傷誘導率最高，誘導率為89.3％且對胚活性影響最小;與不添加CuSO4相比較，成熟胚在添加0.6 mg/L CuSO4的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其誘導率、胚性愈傷率和再生率顯著較高。
　　4.二穗短柄草遺傳轉化的初步研究
　　利用2種不同的轉化方法對短柄草Bd21成熟胚愈傷組織進行轉化。農(nóng)桿菌介導轉化時設置了6組不同的侵染強度，在菌液濃度OD600為

5、0.4，侵染時間為15min的侵染強度下獲得了23棵抗性再生植株，在此侵染強度下轉化效率最高;基因槍轟擊轉化時設置了金粉不同使用量和轟擊距離，在金粉使用量為1.0 mg/L，轟擊距離為12 cm時分別得到2棵抗性再生植株。
　　5.抗性植株的檢測
　　用抗性標記基因Hyg的引物經(jīng)過PCR反應檢測，小麥遺傳轉化中，農(nóng)桿菌介導法轉化獲得到了6棵抗性再生植株，有5株為陽性苗;二穗短柄草Bd21遺傳轉化中，農(nóng)桿菌介導轉化法共得到了4