蜂膠活性成分抗心肌細胞氧化性損傷的作用及機制研究.pdf

1、心肌細胞氧化性損傷是心血管系統(tǒng)結構和功能異常的重要原因之一。尋找及開發(fā)保護心肌細胞氧化損傷性的天然物質是防治心血管疾病的前提。蜂膠是一種天然的活性物質，具有多重生物學活性，如抗氧化、抗菌、抗炎、抗腫瘤等。本文從蜂膠中分離、篩選出了抗心肌細胞氧化損傷作用較強的活性物質以及研究了抗氧化作用機制，為心血管疾病的防治提供物質基礎和理論依據(jù)。
　　本文采用乙醇提取、層析分離、制備型高效液相色譜（HPLC）并結合液相-質譜聯(lián)用（LC-MS），

2、從蜂膠中分離、純化并鑒定出6種化合物。以CCK-8法測得的H9c2心肌細胞存活率為指標確定了700μmol/L和4 h為H2O2氧化損傷條件，篩選出了6種蜂膠中具有抗心肌細胞氧化損傷作用的活性物質，其中三種咖啡酸酯類物質咖啡酸芐酯、咖啡酸苯乙酯（CAPE）和咖啡酸肉桂酯的抗氧化活性高于兩種黃酮類物質白楊素、短葉松素和一種酚酸類物質3,4-二甲氧基肉桂酸（DMCA）。以1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L為三個預處理濃度，分別

3、從生化水平和分子水平研究了咖啡酸芐酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯抗心肌細胞氧化性損傷的作用機制，采用相關試劑盒測定了超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力和丙二醛（MDA）含量，離子比例/成像系統(tǒng)測定了胞內游離鈣離子濃度（[Ca2+]i）；Annexin V-FITC/PI雙染法結合流式細胞儀測得了細胞凋亡率和半定量PCR（RT-PCR）法測定Bcl-2、Bax和半胱天冬酶-3（Caspase-3） mRNA表達水

4、平。結果：
　?。?）經(jīng)H2O2誘導致?lián)pH9c2心肌細胞的MDA含量明顯升高，SOD活力和GSH-Px活力明顯降低，且與正常組細胞呈極顯著差異（P<0.01）。分別用1、5和10μmol/L的咖啡酸芐酯、CAPE、咖啡酸肉桂酯和5μmol/L的陽性對照槲皮素預處理12 h后，再對心肌細胞進行氧化損傷處理。結果，各濃度的供試品以及陽性對照都不同程度地降低了MDA含量，升高了SOD和GSH-Px活力，且呈現(xiàn)劑量依賴性的作用。
　

5、　（2）H9c2心肌細胞氧化損傷后[Ca2+]i極顯著高于正常組（P<0.01）?？Х人崞S酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯預處理后，[Ca2+]i呈現(xiàn)下降趨勢，且隨供試品濃度增大，下降程度越大。其中，各物質高濃度預處理后，[Ca2+]i僅為損傷組的約2/3。
　?。?）經(jīng)H2O2氧化損傷誘導H9c2心肌細胞凋亡，受損細胞中Bcl-2的mRNA表達水平下降，Bax和Caspase-3的mRNA表達水平增強。經(jīng)咖啡酸芐酯、CAPE和咖啡酸肉

6、桂酯干預后，Bcl-2的mRNA表達上調，Bax和Caspase-3的mRNA表達下調，說明咖啡酸芐酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯有效抑制氧化損傷誘導的細胞凋亡。
　　蜂膠中咖啡酸酯類物質（咖啡酸芐酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯）與黃酮類物質（白楊素、短葉松素）一樣均具有保護氧化損傷性心肌細胞的作用，其作用機制可能是通過保護抗氧化酶、抑制脂質過氧化反應、降低[Ca2+]i和改善細胞凋亡現(xiàn)象實現(xiàn)的。其抗凋亡作用可能是通過調控與凋亡相關基因的