蕨麻正丁醇部位對心肌細胞缺氧損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：研究蕨麻正丁醇部位對體外培養(yǎng)心肌細胞缺氧損傷的保護作用及機制。 方法：(1)取新生1～3d的SD大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)，采用MTT法檢測不同缺氧時間細胞的存活率、生化手段檢測培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶(LDH)活性，以確定心肌細胞的最佳缺氧時間，建立心肌細胞缺氧損傷模型。(2)將搏動狀態(tài)良好，生長密度無明顯差異的心肌細胞隨機分為正常對照組、缺氧損傷模型組、蕨麻正丁醇部位高、中、低劑量(0.003g/ml、0.0015g/ml、0.0

2、0075g/ml)組(缺氧同時加入蕨麻正丁醇部位)、陽性藥物丹參(0.003g/ml)組。缺氧6h后，通過細胞存活率、細胞活力、凋亡細胞數(shù)、HE染色、PI-Hoechst染色、總蛋白含量測定及生化指標(biāo)LDH、CK的檢測觀察不同劑量厥麻正丁醇部位對心肌細胞缺氧損傷的保護作用；通過檢測生化指標(biāo)SOD、MDA、NO、NOS；免疫細胞化學(xué)染色檢測caspase3、caspase9蛋白含量；RT-PCR技術(shù)檢測caspase3、caspase9基

3、因表達水平，探討其作用的可能機制。 結(jié)果：(1)心肌細胞形態(tài)學(xué)改變：倒置顯微鏡下，正常對照組心肌細胞從第三天起成簇生長，搏動明顯，細胞簇數(shù)量增多，細胞形狀多樣化，呈圓形、梭形及錐形，并有枝芽狀突起，向細胞簇周圍呈放射狀生長，折光性強。缺氧損傷后，胞體折光性下降，突起縮短或消失，搏動減弱或消失，蕨麻正丁醇部位高劑量組心肌細胞形態(tài)較模型組明顯改善。(2)模型缺氧時間的確定：心肌細胞缺氧0～6h，細胞活性變化幅度最大，單位時間內(nèi)細胞明

4、顯減少，LDH的外漏量顯著增加(P<0.01)，將缺氧時間延長至24h和48h，O.D值和LDH的外漏量無顯著變化，曲線趨于平坦，確定本實驗中心肌細胞缺氧模型的缺氧時間為6h。(3)心肌細胞存活率：模型組(57.7％±3.9％)明顯低于正常組(94.1％±1.2％)(P<0.01)；厥麻正丁醇部位高劑量組(82.3％±4.1％)，厥麻正丁醇部位中劑量組(81.2％±3.8％)，厥麻正丁醇部位低劑量組(79.9％±4.0％)均明顯高于模型

5、組(P<0.01)。(4)心肌細胞活力：模型組(0.053±0.003)明顯低于正常組(0.315±0.012)(P<0.01)：厥麻正丁醇部位高劑量組(0.157±0.011)，厥麻正丁醇部位中劑量組(O.104±0.019)，厥麻正丁醇部位低劑量組(0.039±0.011)均明顯高于模型組(P<0.05或P<0.01)。(5)蕨麻正丁醇部位高劑量組可明顯降低缺氧損傷細胞凋亡的數(shù)量。(6)與正常組比較，模型組細胞蛋白總量明顯減少(P<

6、0.01)；厥麻正丁醇部位高劑量及中劑量組細胞損傷明顯改善，總蛋白量較模型組顯著增加(P<0.01)。(7)蕨麻正丁醇部位各劑量組均可顯著降低缺氧損傷心肌細胞LDH、CK的外漏量(P<0.01)；提高細胞內(nèi)SOD活性(P<0.01)；減少MDA的產(chǎn)生(P<0.05)；升高NO含量(P<0.01)及NOS水平(P<0.05)。(8)厥麻正丁醇部位高劑量組可顯著降低caspase3、caspase9蛋白的表達(P<0.01)。(9)RT-P