預適應聯(lián)合后適應對大鼠腦缺血-再灌注損傷保護作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　觀察缺血預適應、缺血后適應以及兩者聯(lián)合應用對大鼠腦缺血/再灌注損傷的保護作用，對大鼠腦缺血/再灌注損傷后缺血腦組織中HSP70蛋白、不同亞型HSP70基因表達以及磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt(PI3K/Akt)、細胞外信號調節(jié)激酶1/2(ERK1/2)信號通路活性的影響。
　　方法:
　　120只SD大鼠隨機分為5組:假手術組、腦缺血/再灌注損傷模型組、預適應組、后適應組以及預適應+后適應組。除假手術組大鼠

2、外，其余各組均用線栓法閉塞大腦中動脈120 min后再灌注48 h，制作腦缺血/再灌注損傷模型;預適應在造模24和1h前采用3個循環(huán)的缺血15 s/再灌注30 s的方法誘導;后適應于再灌注前采用3個循環(huán)的再灌注30 s/缺血15s的方法誘導。再灌注48 h后，分別檢測大鼠神經功能、腦梗死灶體積、腦組織氧化應激損傷生化指標以及神經元凋亡情況。50只大鼠隨機分為5組，再灌注48 h后，分別用法免疫組化檢測HSP70蛋白的表達;用Real-t

3、ime PCR檢測HSPA8、HSPA1A及HSPA12B基因表達;用Western Blot檢測磷酸化Akt（p-Akt）和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表達。
　　結果:
　　與模型組比較，預適應與后適應均能明顯改善大鼠腦缺血/再灌注損傷后的神經功能和減少腦梗死灶體積，兩者保護作用強度相似，無明顯差異，預適應聯(lián)合后適應改善大鼠腦缺血/再灌注損傷后的神經功能和減少腦梗死灶體積的作用明顯強于單獨的預適應或后適應。

4、腦缺血/再灌注后，大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性降低和丙二醛(MDA)含量增高，預適應略有升高SOD活性和降低MDA含量的作用，而后適應能顯著升高腦組織中SOD活性和降低MDA含量，預適應聯(lián)合后適應后，升高腦組織SOD活性、降低MDA含量的作用進一步增加，明顯強于單獨的預適應或后適應。與模型組比較，預適應和后適應均能減少缺血區(qū)腦組織的神經細胞凋亡數量，而后適應減少神經細胞凋亡數量的作用強于預適應，兩者聯(lián)合應用較少腦缺血/再灌注損

5、傷后神經元凋亡的作用增強。假手術組腦組織HSP70呈微量表達，與假手術組比較，腦缺血/再灌注損傷模型組腦組織HSP70呈輕度表達，而預適應和后適應組HSP70陽性細胞明顯增多，呈中度表達，預適應+后適應組可見大量HSP70陽性細胞，呈高度表達。大鼠腦缺血/再灌注后，缺血側皮質、皮質下和海馬組織中HSPA8、HSPA1A及HSPA12B3個基因的表達量均略微升高，兩處升高的模式相似。單獨預適應或后適應均能夠顯著升高HSPA8、HSPA1A

6、及HSPA12B基因的表達量，其中HSPA1A的表達量則在預適應時升高明顯，而HSPA8 mRNA在后適應時表達最高，HSPA12B的表達量兩者無明顯差異;將預適應聯(lián)合后適應，上述3個基因的表達量均較單獨采用預適應或后適應時顯著增高。Western Blot檢測p-Akt和p-ERK1/2結果顯示:與對照組比較，腦缺血/再灌注后p-Akt和p-ERK1/2表達水平升高;預適應能輕度升高腦缺血/再灌注后p-Akt和明顯抑制p-ERK1/2

7、的表達，而后適應明顯升高腦缺血/再灌注后p-Akt和輕度抑制p-ERK1/2表達;預適應和后適應聯(lián)合應用后，升高p-Akt和抑制p-ERK1/2表達的作用明顯強于各自單獨應用。
　　結論:
　　1、預適應、后適應對大鼠腦缺血/再灌注損傷有保護作用，兩者聯(lián)合應用能進一步增強上述作用;
　　2、預適應、后適應均能上調HSP70的表達，但兩者影響的HSP70亞型不同;
　　3、預適應和后適應均能升高p-Akt水平和抑制