介孔氧化硅納米材料介導(dǎo)siRNA進(jìn)行基因治療的初步研究.pdf

1、在眾多的基因治療載體研究中,介孔氧化硅納米材料(MSNs)作為基因載體的研究越來越受到人們的廣泛重視,近年來,已經(jīng)成為了納米材料研究中的前沿和熱點(diǎn)之一。這主要是由于它自身具有的一系列如規(guī)則的形狀和孔道結(jié)構(gòu)、較高的比表面積、易制備、較大的孔積、孔徑、在一定范圍內(nèi)易調(diào)控且容易靶向修飾等優(yōu)勢(shì)。
　　本文首先介紹了掃描電鏡和透射電鏡下未經(jīng)修飾(D-MSNs)、20％氨基化修飾(N-MSNs)、4%轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向修飾(Tf-MSNs)的MSN

2、s的形貌特征。接下來通過X-射線衍射、Zeta電位、傅里葉變換紅外光譜來表征材料的成分、結(jié)構(gòu)及重要的物化性能,并利用瓊脂糖凝膠電泳與微量紫外分光光度計(jì)相結(jié)合的方式來研究材料對(duì)治療基因的吸附、釋放以及保護(hù)功能。最后利用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀來檢測(cè)材料攜帶功能化的siRNA進(jìn)行Hela細(xì)胞的體外攝入效果以及對(duì)Survivin基因進(jìn)行沉默致使Hela細(xì)胞凋亡的情況。
　　結(jié)果表明MSNs為規(guī)則均一的球形粒子,粒徑為(200±10)

3、nm;具有一定的孔道結(jié)構(gòu)且孔道六方有序;紅外檢測(cè)表明成功進(jìn)行了氨基化修飾和轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾。未經(jīng)DNA吸附之前材料分散,吸附特定量DNA之后,N-MSNs有聚集的趨勢(shì),Tf-MSNs有少量的聚集現(xiàn)象發(fā)生。在2mg的MSNs體系中,D-MSNs、N-MSNs、Tf-MSNs對(duì)20bp的DNA片段(160μg/mL×100μL)的吸附率為12.1%、93.7%、90%;N-MSNs、Tf-MSNs的釋放率為72.8%、60.5%;吸附DNA后,

4、核酸酶處理與未處理的材料同時(shí)進(jìn)行釋放,釋放率相差非常小。采用Hela細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞攝入,D-MSNs、N-MSNs、Tf-MSNs的攝入效率分別為34.25%、95.86%、99.33%;細(xì)胞凋亡率檢測(cè)為4.14%、8.45%、16.98%。
　　此次研究,成功的對(duì)MSNs進(jìn)行了針對(duì)于體外轉(zhuǎn)染的氨基化修飾和針對(duì)于靶向轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾。細(xì)胞外研究修飾后的材料對(duì)治療基因具有很好的吸附釋放與保護(hù)效果。Hela細(xì)胞攝入效率非常高,并且Tf