REM期睡眠剝奪對(duì)大鼠大腦皮質(zhì)ATF-6α和CHOP蛋白表達(dá)的影響及藥物干預(yù).pdf

1、目的:通過觀察不同時(shí)間快速眼動(dòng)(REM)期睡眠剝奪及中樞性興奮藥鹽酸甲氯芬酯干預(yù)后大鼠大腦皮質(zhì)ATF-6α和前凋亡因子CHOP/GADDl53蛋白表達(dá)的變化,探討睡眠剝奪是否造成了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,是否啟動(dòng)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)的凋亡途徑以及鹽酸甲氯芬酯可能的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。 方法:采用改良多平臺(tái)水環(huán)境REM期睡眠剝奪法(MMPM)制備大鼠REM期睡眠剝奪模型。成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為REM期睡眠剝奪組(RSD)、正常對(duì)照組(CC,n=10)和大

2、平臺(tái)實(shí)驗(yàn)環(huán)境對(duì)照組(TC,n=10)。REM睡眠剝奪組又分睡眠剝奪模型組(n=30),生理鹽水干預(yù)組(n=30)以及鹽酸甲氯芬酯干預(yù)組(n=30),睡眠剝奪組各分為睡眠剝奪1天(SD1d)、3天(SD3d)、5天(SD5d)3個(gè)時(shí)間點(diǎn)。鹽酸甲氯芬酯干預(yù)組從睡眠剝奪第一天開始按100mg/Kg/d劑量腹腔注射鹽酸甲氯芬酯；生理鹽水組按同樣的時(shí)間和方式給予等量生理鹽水。運(yùn)用免疫熒光技術(shù)分析大鼠大腦皮質(zhì)ATF-6α和CHOP蛋白表達(dá)及其變化,

3、運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印記(Western-Blot)技術(shù)對(duì)大鼠大腦皮質(zhì)ATF-6α和CHOP作半定量分析。 結(jié)果: 1、免疫熒光染色結(jié)果顯示皮質(zhì)區(qū)ATF-6α在細(xì)胞漿和胞核均有分布。ATF-6α在正常對(duì)照組(CC)和環(huán)境對(duì)照組(TC)以胞漿表達(dá)為主,其表達(dá)量在TC與CC兩組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。睡眠剝奪第1天(SD1)起,大鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞的胞核中ATF-6α表達(dá)開始增多,SD3組可見ATF-6α呈密集分布,SD5組細(xì)胞核內(nèi)的A

4、TF-6α蛋白表達(dá)仍較多,但比SD3組有所減少。CC組和TC組與SD1、SD3、SD5組相比ATF-6α表達(dá)量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,SD1、SD3、SD5組間兩兩比較也有顯著性差異。Western-Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果與之一致； 2、免疫熒光染色顯示大鼠大腦皮質(zhì)CHOP為細(xì)胞核內(nèi)著色,胞漿未見著色。CC組和TC組未見明顯的CHOP表達(dá),睡眠剝奪第一天可見CHOP蛋白陽性表達(dá),SD3組CHOP蛋白表達(dá)明顯增多,至睡眠剝奪第5天達(dá)到高峰,各組

5、間差異比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果與之一致。 3、鹽酸甲氯芬酯干預(yù)后,大鼠睡眠剝奪1天、3天、5天三個(gè)時(shí)點(diǎn)的大腦皮質(zhì)ATF6α和CHOP的表達(dá)均被抑制,與生理鹽水干預(yù)組比較有顯著性差異。 結(jié)論: 1、REM期睡眠剝奪早期即可引發(fā)ATF-6α表達(dá)增多,說明其可能啟動(dòng)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的未折疊蛋白應(yīng)答通路之一的ATF-6途徑,即誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。隨著睡眠剝奪時(shí)間延長,ATF-6α仍維持在高水平表達(dá),

6、提示ATF-6通路可能參與啟動(dòng)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的凋亡程序。長時(shí)間睡眠剝奪(5天)ATF-6α降低可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能障礙,不能繼續(xù)適應(yīng)新的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境變化有關(guān)。 2、CHOP是一種前細(xì)胞凋亡因子,它的過度表達(dá)可導(dǎo)致生長停滯和細(xì)胞凋亡。隨著睡眠剝奪時(shí)間的延長,CHOP表達(dá)增多,并持續(xù)在較高水平,意味著睡眠剝奪可能最終啟動(dòng)細(xì)胞凋亡程序,這或許就是睡眠剝奪造成機(jī)體各種損傷的機(jī)制之一。 3、中樞性興奮藥物鹽酸甲氯芬酯可以抑制睡眠剝奪后引起