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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
鉛是人們所認(rèn)識(shí)的最古老的毒物之一,是一種對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng),增殖,信號(hào)傳導(dǎo)無已知必要作用的無機(jī)重金屬。低濃度的鉛暴露亦能引起神經(jīng)系統(tǒng)的損傷,包括智商、聽力、視力的降低和外周神經(jīng)功能的損害。發(fā)育期的神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)鉛更敏感,即使鉛暴露濃度低于兒童鉛中毒的下限值10μg/dl也能損傷其神經(jīng)系統(tǒng)。這與發(fā)育期兒童的血腦屏障發(fā)育尚未完善,胃腸道對(duì)鉛的吸收率高及排鉛能力低等有關(guān)。嬰幼兒鉛暴露可引起不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)損害,主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶能力
2、降低和神經(jīng)行為異常,并且這種損傷可持續(xù)到成年階段,甚至終生。海馬是參與學(xué)習(xí)記憶形成的重要腦區(qū),研究者也已經(jīng)證實(shí)鉛通過作用于海馬來影響學(xué)習(xí)記憶功能。近些年來,人們對(duì)鉛對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響及其細(xì)胞和分子學(xué)機(jī)制做了廣泛的研究。但具體的機(jī)制仍然不清楚,故開展其相關(guān)機(jī)制研究具有重要意義。
神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(GAP-43)在學(xué)習(xí)記憶過程中發(fā)揮重要作用。發(fā)育期低濃度鉛暴露是否影響該蛋白在大腦皮質(zhì)和海馬中的表達(dá)?其影響機(jī)制如何?這些都有待于研
3、究。據(jù)此,我們通過孕期開始給予母鼠低濃度鉛暴露建立發(fā)育期仔鼠鉛中毒模型,研究仔鼠不同時(shí)間點(diǎn)大腦皮質(zhì)和海馬中GAP-43的表達(dá)情況及學(xué)習(xí)記憶狀況,探討發(fā)育期慢性低濃度鉛暴露對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶影響的機(jī)制,為兒童鉛中毒的預(yù)防提供新的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:
健康2月齡雌性大鼠30只,按體重隨機(jī)分成對(duì)照組、低劑量鉛暴露組1、2,每組10只雌鼠。各組大鼠均伺以普通飼料,飲用雙蒸水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后雌鼠和正常雄鼠1:1合
4、籠,以次晨發(fā)現(xiàn)陰栓或陰道分泌物鏡檢發(fā)現(xiàn)精子者確定為妊娠0天,自懷孕第一天鉛低劑量組1、2分別飲用0.05%、0.2%醋酸鉛溶液,直到仔鼠出生后28天(PN28)。對(duì)照組繼續(xù)飲用雙蒸水。鉛暴露組仔鼠斷乳前通過母乳飲用醋酸鉛,斷乳后繼續(xù)飲用相同濃度醋酸鉛。PN1、PN3、PN7、PN14、PN21、PN28解剖動(dòng)物取出腦海馬和大腦皮質(zhì),放入液氮中,轉(zhuǎn)存到-70℃冰箱中;PN28測(cè)腦鉛和血鉛;PN56進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。取出仔鼠海馬和大腦皮質(zhì)標(biāo)本
5、,免疫組化、Western blot方法檢測(cè)腦海馬、大腦皮質(zhì)GAP-43蛋白的表達(dá)的變化。
結(jié)果:
1、發(fā)育期慢性低濃度鉛暴露對(duì)大鼠血鉛和海馬、大腦皮質(zhì)鉛含量的影響
各慢性染鉛組仔鼠血鉛和腦海馬、大腦皮質(zhì)鉛含量明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),升高程度與飲用水的鉛濃度呈劑量依賴性關(guān)系。
2、發(fā)育期慢性低濃度鉛暴露對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響
在水迷宮實(shí)驗(yàn)中
6、,結(jié)果表明慢性鉛暴露可明顯損傷仔鼠的空間定位航行能力,損傷程度與飲用鉛的濃度呈劑量依賴性關(guān)系。
3、發(fā)育期慢性低濃度鉛暴露對(duì)腦海馬和大腦皮質(zhì)GAP-43蛋白表達(dá)的影響
(1)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,在海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)、大腦皮質(zhì)PN7、PN14、PN21、PN28時(shí)和DG區(qū)PN7、PN14、PN21時(shí)各染鉛組的積分光密度值與對(duì)照組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),即染鉛組該蛋白的表達(dá)
7、含量低于對(duì)照組,CA1區(qū)和大腦皮質(zhì)PN1、PN3時(shí)及DG區(qū)PN28時(shí)低劑量組2與對(duì)照組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01),CA3區(qū)PN1、PN3時(shí)各染鉛組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
(2)Western blot結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,發(fā)育期慢性低濃度鉛暴露對(duì)大鼠腦海馬和大腦皮質(zhì)GAP-43蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì),且其與鉛暴露水平有劑量依賴性關(guān)系及發(fā)育時(shí)間表達(dá)差異。
結(jié)論:<
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